La versatilidad del reactivo de transfección CRISPR Transfectamine™ 6000 admite varios sistemas CRISPR/Cas9, incluidos plásmidos, ribonucleoproteínas (RNP) y ARNm.
Descripción
El reactivo de transfección CRISPR Transfectamine™ 6000 es una fórmula no liposomal diseñada para una administración y eficacia óptimas de los componentes CRISPR/Cas9 en una amplia gama de tipos de células.
Diseñado para la edición genómica dirigida, este reactivo demuestra una eficiencia de transfección superior, en particular en líneas celulares que suelen ser resistentes a la transfección. La versatilidad del reactivo de transfección CRISPR Transfectamine™ 6000 es compatible con varios sistemas CRISPR/Cas9, incluidos plásmidos, ribonucleoproteínas (RNP) y ARNm. Su formulación se ha optimizado para minimizar la citotoxicidad al tiempo que se mantiene la viabilidad celular, lo que garantiza resultados experimentales más precisos y confiables.
El sencillo protocolo asociado con nuestro reactivo reduce la necesidad de una optimización extensa, agilizando el flujo de trabajo y conservando tiempo y recursos valiosos. El reactivo de transfección CRISPR Transfectamine™ 6000 es adecuado para diversas aplicaciones, como experimentos de knock-out y knock-in de genes, la generación de líneas celulares editadas genéticamente mediadas por CRISPR, estudios de genómica funcional e investigación en edición genética terapéutica.
Nombre en ingles: Transfectamine™ 6000 CRISPR Transfection Reagent
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| 60023 | Reactivo de Transfección Transfectamine™ 6000 CRISPR | 1 ml |
| 60024 | Reactivo de Transfección Transfectamine™ 6000 CRISPR | 5 ml |
| 60028 | Reactivo de Transfección Transfectamine™ 6000 CRISPR | 50 ul |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Congelación a <-15°C. Minimizar exposición a la luz. Se entrega con geles.
Propiedades fisicas
| Solvente | Agua |
PREPARACIÓN CELULAR
Células de cultivo a ~ 80-90% de confluencia en el momento de la transfección.
Reemplazar con medio de crecimiento fresco antes de la transfección. Por ejemplo, reemplace con 2 ml de medio por pocillo para placas de 6 pocillos y 6 ml de medio para placas de 10 cm.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Preparar la mezcla de ADN Transfectamine™ 6000-CRISPR
1. Mezcle 2,5 µg de ADN con 200 µL de medio sin suero.
2. Añada 7,5 µL de reactivo CRISPR Transfectamine™ 6000 al paso 1.
3. Mezcle bien e incube a temperatura ambiente durante 20 minutos.
Nota: La relación recomendada de reactivo de transfección CRISPR Transfectamine™ 6000 (uL):ADN (ug) es de 3-5 µL:1 µg, pero es necesaria la optimización para diferentes líneas celulares.
EJEMPLO DE PROTOCOLO EXPERIMENTAL
Tabla 1. Condiciones de transfección recomendadas para placas de 6 pocillos y 10 cm utilizando el reactivo de transfección CRISPR Transfectamine™ 6000.
| Componente | Placa de 6 pozos (por pozo) | Placa de 10cm |
| Fresh culture medium | 2 ml | 6 ml |
| CRISPR Plasmid | ~2.5 µg | 7.5 ~ 10 µg |
| Serum-free medium | 200 µL | 600µl |
| Transfectamine™ 6000 CRISPR Transfection Reagent | ~7.5 µL | ~22.5 µL |
Imagen
Tabla 1. Comparación de la eficiencia de transfección en células HeLa para el plásmido CRISPR-Cas9-GFP utilizando el reactivo de transfección CRISPR Transfectamine™ 6000 y Lipofectamine 2000. Ambos reactivos se utilizaron para transfectar células HeLa en un formato de 96 pocillos y se analizó la expresión de GFP 48 y 72 horas después de la transfección. El reactivo de transfección CRISPR Transfectamine™ 6000 proporcionó una mayor eficiencia de transfección de GFP que Lipofectamine 2000.
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