El Reactivo de Transfección Transfectamine™ mRNA es un reactivo de transfección potente y versátil diseñado para introducir una mayor cantidad de ARNm en células eucariotas o, más específicamente, en células animales.
Descripción
El reactivo de transfección Transfectamine™ mRNA es un reactivo de transfección potente y versátil diseñado para introducir una mayor cantidad de ARNm en células eucariotas o, más específicamente, en células animales. Ofrece una alta eficiencia de transfección en una amplia variedad de líneas celulares adherentes y en suspensión, incluidas las células difíciles de transfectar.
No se requiere captación nuclear, lo que da como resultado una expresión de proteínas más rápida que la transfección de ADN sin el riesgo de integración genómica. La baja toxicidad del reactivo de transfección de ARNm Transfectamine™ permite una mayor viabilidad de las células transfectadas.
El reactivo de transfección de ARNm Transfectamine™ no requiere un medio especial y es más fácil de usar en comparación con la mayoría de los reactivos de transfección comerciales.
Nombre en ingles: Transfectamine™ mRNA Transfection Reagent
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-60030 | Reactivo de Transfección Transfectamine™ mRNA | 0.5 ml |
| AAT-60031 | Reactivo de Transfección Transfectamine™ mRNA | 5 ml |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO)
PREPARACIÓN CELULAR
Células de cultivo a ~ 90% de confluencia en el momento de la transfección.
Reemplazar con medio de crecimiento fresco antes de la transfección. Por ejemplo, reemplace con 2 ml de medio por pocillo para placas de 6 pocillos y 6 ml de medio para placas de 10 cm.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Mezcla de ARN-reactivo de transfección de ARNm Transfectamine™
1. Mezcle 2,5 μg de mRNA con 200 μL de medio sin suero.
2. Agregue 7,5 µl de reactivo de transfección de ARNm Transfectamine™ al paso 1.
3. Mezclar bien e incubar a temperatura ambiente durante 20 minutos.
Nota: La relación entre el reactivo de transfección de ARNm Transfectamine™ y el ARNm debe optimizarse para diferentes líneas celulares. En general, relación de reactivo de transfección de ARNm Transfectamine™ (µL) a ARNm (µg) = (3 a 5 µL) a 1 µg.
Tabla 1. Detalle del protocolo de muestra para placas de 6 pocillos como se muestra en la siguiente tabla.
| Componente | Placa de 6 pozos (por pozo) |
| Fresh culture medium | 2 mL |
| Purified mRNA | ~2.5 µg |
| Serum-free medium | 200 µL |
| Transfectamine™ mRNA Transfection Reagent | ~7.5 µL |
Imagen
Figura 1. Comparación de eficiencia de transfección (panel superior) y comparación de toxicidad celular (panel inferior) en células HeLa. Las células HeLa se cultivaron en una placa de 6 pocillos hasta una confluencia de ~90 %. Se transfectaron 2,5 µg de ARNm con Lipofectamine MessengerMAX y Reactivo de transfección de ARNm Transfectamine™, respectivamente. Las imágenes se tomaron 18 horas después de la transfección usando un microscopio fluorescente con el canal FITC (panel superior). Aunque la eficacia de la transfección fue similar para Lipofectamine MessengerMAX y Transfectamine™ mRNA Transfection Reagent, la mayoría de las muestras transfectadas con Lipofectamine MessengerMAX se codificaron, mientras que las células transfectadas con Transfectamine™ mRNA Transfection Reagent parecían mucho más sanas (panel inferior).
Figura 2. Comparación de viabilidad celular en células HeLa. Las células HeLa se incubaron con Transfectamine™ mRNA Transfection Reagent y Lipofectamine MessagerMax, respectivamente, según el protocolo sugerido sin mRNA. Después de 24 horas, se midió la viabilidad celular en ambos grupos con el kit de cuantificación de células colorimétricas WST-8 Cell Meter™ (Cat#22770). La mayor absorbancia a 460 representa un mayor número de células viables.
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Referencias
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