Kit de ensayo para la actividad del proteasoma Fluorometrico es homogéneo y mide la actividad de la proteasa similar a la quimotripsina asociada con el complejo de proteasoma en células cultivadas o lisados celulares.
Descripción
Kit de ensayo de actividad del proteasoma 20S con fluorescencia verde Amplite®
Nuestro kit de ensayo de Proteasoma Fluorometric 20S es un ensayo fluorescente homogéneo que mide la actividad de la proteasa similar a la quimotripsina asociada con el complejo de proteasoma en células cultivadas o lisados celulares. Este kit utiliza LLVY-R110 como indicador fluorogénico de la actividad del proteasoma. La escisión de LLVY-R110 por el proteasoma genera el R110 fluorescente de color verde fuerte que se monitorea fluorométricamente a 520-530 nm con una excitación de 480-500 nm. El kit proporciona todos los componentes esenciales con un protocolo de ensayo optimizado.
El ensayo es robusto y se puede adaptar fácilmente para ensayos de alto rendimiento para la evaluación de la actividad del proteasoma o la detección de inhibidores en células cultivadas o en solución. Tambien se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de fluorescencia de 96 y 384 pozos.
La función principal del proteasoma es degradar proteínas innecesarias o dañadas mediante proteólisis, una reacción química que rompe los enlaces peptídicos. Esta vía de degradación proteosómica es esencial para muchos procesos celulares, incluido el ciclo celular, la regulación de la expresión génica y las respuestas al estrés oxidativo.
La forma más común del proteasoma en esta vía es el proteasoma 26S, un complejo proteolítico dependiente de ATP, que contiene una estructura de partículas central 20S (700 kDa) y dos tapas reguladoras 19S (700 kDa). El núcleo 20S contiene tres actividades proteolíticas principales, incluidas las similares a la quimotripsina, la tripsina y la caspasa. Es responsable de la descomposición de proteínas clave involucradas en la apoptosis, la reparación del ADN, la endocitosis y el control del ciclo celular.
Nombre en Ingles: Amplite® Fluorimetric Proteasome 20S Activity Assay Kit *Green Fluorescence*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| 13456 | Kit de ensayo de actividad del proteasoma 20S con fluorescencia verde Amplite® | 100 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Cutoff | 515 nm |
| Placa recomendada | Sólida negra |
| Especificaciones instrumento | Modo de lectura superior |
Componentes
| Componente A: Proteasome LLVY-R110 Substrate | 1 vial |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (10 mL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
Espectro
Abrir en Advanced Spectrum Viewer
Propiedades espectrales
| Coeficiente de extinción (cm -1 M -1) | 80000 |
| Excitación (nm) | 500 |
| Emisión (nm) | 522 |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Proteasoma LLVY-R110 Solución madre de sustrato (400X)
Agregue 25 µL de DMSO (Componente C) al vial de Proteasome LLVY-R110 Substrate (Component A) y mezcle bien para preparar una solución madre de Proteasome LLVY-R110 Substrate 400X.
PREPARACION CELULAR
Para obtener guia sobre la preparación de muestras de células, visite: https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 25 μL de solución madre de sustrato de Proteasome LLVY-R110 400X en 10 mL de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para obtener una solución de trabajo de Proteasome. Nota: Esta solución de trabajo de Proteasoma es suficiente para 1 placa. Proteger de la luz.
Imagen
Figura 1. Detección de actividad de proteasoma en células Jurkat con el kit de ensayo de actividad de proteasoma 20S fluorimétrico Amplite®. Las células Jurkat se sembraron el mismo día a razón de 500 000 células/90 µl/pocillo en una placa Costar de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente. Las células se trataron con o sin H2O2 50 mM durante 30 minutos. Se añadió la solución de carga del ensayo de proteasoma (100 µl/pocillo) y se incubó en incubadora de CO2 a 37 °C al 5 % durante 3 horas. La intensidad de la fluorescencia se midió a Ex/Em = 490/525 utilizando un lector de microplacas fluorescentes Gemini (Molecular Devices).
Productos sugeridos
Sustratos Amplite® para sustratos fluorogénicos
Cat. 11000 Amplite® ADHP [10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine] CAS#: 119171-73-2
Cat. 11005 Amplite® Blue
Cat. 11009 Amplite® IR
Cat. 11011 Amplite® Red
Bibliografía
Ver las 14 bibliografias: Citation Explorer
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Journal: Biomaterials (2019): 119248