Ensayo Amplite® de actividad de Proteasoma 20S Fluorimétrico

Kit de ensayo para la actividad del proteasoma Fluorometrico de Fluorescencia verde,  es homogéneo y mide la actividad de la proteasa similar a la quimotripsina asociada con el complejo de proteasoma en células cultivadas o lisados ​​celulares.

Descripción

Nuestro kit de ensayo de Proteasoma Fluorometric 20S es un ensayo fluorescente homogéneo que mide la actividad de la proteasa similar a la quimotripsina asociada con el complejo de proteasoma en células cultivadas o lisados ​​celulares. Este kit utiliza LLVY-R110 como indicador fluorogénico de la actividad del proteasoma. La escisión de LLVY-R110 por el proteasoma genera el R110 fluorescente de color verde fuerte que se monitorea fluorométricamente a 520-530 nm con una excitación de 480-500 nm. El kit proporciona todos los componentes esenciales con un protocolo de ensayo optimizado.

El ensayo es robusto y se puede adaptar fácilmente para ensayos de alto rendimiento para la evaluación de la actividad del proteasoma o la detección de inhibidores en células cultivadas o en solución. Tambien se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de fluorescencia de 96 y 384 pozos.

La función principal del proteasoma es degradar proteínas innecesarias o dañadas mediante proteólisis, una reacción química que rompe los enlaces peptídicos. La vía de degradación proteosómica es esencial para muchos procesos celulares, incluido el ciclo celular, la regulación de la expresión génica y las respuestas al estrés oxidativo.

La forma más común del proteasoma en esta vía es el proteasoma 26S, un complejo proteolítico dependiente de ATP, que contiene una estructura de partículas central 20S (700 kDa) y dos tapas reguladoras 19S (700 kDa). El núcleo 20S contiene tres actividades proteolíticas principales, incluidas las similares a la quimotripsina, la tripsina y la caspasa. Es responsable de la descomposición de proteínas clave involucradas en la apoptosis, la reparación del ADN, la endocitosis y el control del ciclo celular.

Nombre en Ingles: Amplite® Fluorimetric Proteasome 20S Activity Assay Kit *Green Fluorescence*

CatalogoProductoPresentación
AAT-13456Kit de ensayo Amplite® de actividad de Proteasoma 20S Fluorimétrico100 pruebas

Importante: Solo para uso en investigación (RUO).

Plataforma

Lector de Microplacas de Fluorescencia

Excitación490 nm
Emisión525 nm
Cutoff515 nm
Placa recomendadaSólida negra
Especificaciones instrumentoModo de lectura superior

Componentes

Componente A: Proteasome LLVY-R110 Substrate1 vial
Componente B: Buffer de ensayo 1 botella (10 mL)
Componente C: DMSO1 vial (100 µL)

Espectro

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Propiedades espectrales

Coeficiente de extinción (cm -1 M -1)80000
Excitación (nm)500
Emisión (nm)522

PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

Proteasoma LLVY-R110 Solución madre de sustrato (400X)
Agregue 25 µL de DMSO (Componente C) al vial de Proteasome LLVY-R110 Substrate (Component A) y mezcle bien para preparar una solución madre de Proteasome LLVY-R110 Substrate 400X.


PREPARACION CELULAR

Para obtener guia sobre la preparación de muestras de células, visite: https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html


PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO

Agregue 25 μL de solución madre de sustrato de Proteasome LLVY-R110 400X en 10 mL de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para obtener una solución de trabajo de Proteasome. Nota: Esta solución de trabajo de Proteasoma es suficiente para 1 placa. Proteger de la luz.

Imagen

Figura 1. Detección de actividad de proteasoma en células Jurkat con el kit de ensayo de actividad de proteasoma 20S fluorimétrico Amplite®. Las células Jurkat se sembraron el mismo día a razón de 500 000 células/90 µl/pocillo en una placa Costar de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente. Las células se trataron con o sin H2O2 50 mM durante 30 minutos. Se añadió la solución de carga del ensayo de proteasoma (100 µl/pocillo) y se incubó en incubadora de CO2 a 37 °C al 5 % durante 3 horas. La intensidad de la fluorescencia se midió a Ex/Em = 490/525 utilizando un lector de microplacas fluorescentes Gemini (Molecular Devices).

Productos sugeridos

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Bibliografía

Quantitative reactive cysteinome profiling reveals a functional link between ferroptosis and proteasome-mediated degradation
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Journal: Cell Death \& Differentiation (2022): 1–12

TRIB2 modulates proteasome function to reduce ubiquitin stability and protect liver cancer cells against oxidative stress
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Photothermally Controlled MHC Class I Restricted CD8+ T-Cell Responses Elicited by Hyaluronic Acid Decorated Gold Nanoparticles as a Vaccine for Cancer Immunotherapy
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Journal: Molecular and cellular biology (2017): e00419–16

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Application Notes

Interactome analysis reveals a n 1 ovel role for RAD6 in the regulation of proteasome activity and localization in response to DNA damage
L-BMAA Induced ER Stress and Enhanced Caspase 12 Cleavage at Low Nonexcitotoxic Concentrations
Interactome analysis reveals a n 1 ovel role for RAD6 in the regulation of proteasome activity and localization in response to DNA damage
L-BMAA Induced ER Stress and Enhanced Caspase 12 Cleavage at Low Nonexcitotoxic Concentrations
Interactome analysis reveals a n 1 ovel role for RAD6 in the regulation of proteasome activity and localization in response to DNA damage

FAQ

Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?
Can I use Amplite Fluorimetric Glutamic Acid Assay Kit with an absorbance microplate reader?
How are fatty acids activated?

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