Kit de ensayo de actividad 3/7, 8 y 9 de caspasa multiplexada Cell Meter™ *Colores de fluorescencia triple*
Descripción
Nuestros kits de ensayo Cell Meter™ son un conjunto de herramientas para monitorear la viabilidad celular. Hay una variedad de parámetros que se pueden usar para monitorear la viabilidad celular.
La activación de caspasas es ampliamente aceptada como un indicador fiable de la apoptosis celular. Este kit en particular está diseñado para monitorear simultáneamente la activación de cuatro caspasas clave (caspasa-3/7, 8 y 9) involucradas en la apoptosis celular usando tres colores fluorescentes distintos. Utiliza DEVD-ProRed™, IETD-R110 y LEHD-AMC como indicadores fluorogénicos para la actividad de caspasa 3/7, 8 y 9 respectivamente. Tras la escisión de caspasa, los sustratos de caspasa DEVD-ProRed™, IETD-R110 y LEHD-AMC generan tres fluoróforos distintos: ProRed™ (fluorescencia roja), R110 (fluorescencia verde) y AMC (fluorescencia azul), que se pueden monitorear fácilmente en un solo ensayo debido a su buena separación espectral.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-22820 | Cell Meter™ Multiplexing Caspase 3/7, 8 and 9 Activity Assay Kit | 100 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | Ver Tabla 1 |
| Emisión | Ver Tabla 1 |
| Placa recomendada | Pared negra/Fondo transparente |
| Especificaciones Instrumento | Modo de lectura inferior o superior |
Tabla 1
Longitudes de onda espectrales para Caspases 3/7, 8, y 9.
| Caspase | Fluorescence | Excitation | Emission |
| Caspase 3/7 | Red | 535 nm | 620 nm |
| Caspase 8 | Green | 490 nm | 525 nm |
| Caspase 9 | Blue | 370 nm | 450 nm |
Componentes
| Componente A: Caspase 3/7 Substrate (DEVD-ProRed™, 200X ) | 1 vial (50 µL/vial) |
| Componente B: Caspase 8 Substrate (IETD-R110, 200X) | 1 vial (50 µL/vial) |
| Componente C: Caspase 9 Substrate (LEHD-AMC, 200X) | 1 vial (50 µL/vial) |
| Componente D: Buffer de ensayo | 1 botella (30 mL) |
Preparación de solución de trabajo
- Solución de trabajo de actividad de caspasa única
Prepare una solución de trabajo de caspasa 3/7, caspasa 8 o caspasa 9 agregando 50 µl de sustrato (componente A, B o C) en 10 ml de buffer de ensayo (componente D) y mézclelos bien.
- Solución de trabajo de actividad dual o tricaspasa:
Agregue 50 µl de cada sustrato de caspasa interesado en 10 ml de buffer de ensayo (componente D) para formar la solución de trabajo. Nota: Prepare las soluciones de sustrato probadas y el volumen necesario proporcionalmente.
Para conocer guias sobre la preparación de muestras de células, visite: https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. Detección de actividades de caspasa en células Jurkat. Se sembraron células Jurkat el mismo día a razón de 200.000 células/pocillo en una placa de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente. Las células se trataron con estaurosporina a la concentración final de 1 mM durante 4 horas (barra roja), mientras que las células no tratadas se usaron como control (barra azul). Se añadió la solución de carga de ensayo de caspasa única (100 uL/pocillo) (en el n.° 1 para caspasa 3/7, n.° 2 para caspasa 8 o n.° 3 para caspasa 9) o solución de carga de ensayo de triple caspasa (n.° 4 para caspasa 3 /7, 8 y 9 juntos) y se incubó a temperatura ambiente durante 1 hora. La intensidad de la fluorescencia se midió con el lector de microplacas de fluorescencia FlexStation a la longitud de onda indicada. Las actividades de las caspasas 3/7, 8 y 9 se pueden detectar en un solo ensayo sin interferencias de otras caspasas.
Figura 2. Apoptosis inducida por cSBL en células H2452 y MSTO mediante la activación de la vía de la caspasa. La activación de caspasa-3, -8 y -9 se detectó mediante transferencia Western (A, B) o fluorometría (C, D). La fluorometría se realizó de forma independiente tres veces y los datos se expresan como la media ± SD. La significación estadística de estos experimentos en comparación con el control se muestra a continuación: *P<0,05, **P<0,01, ***P<0,001. Fuente: La lectina que se une al ácido siálico de los huevos de rana toro inhibe el crecimiento de células de mesotelioma maligno humano in vitro e in vivo por Tatsuta T et al., PLOS, enero de 2018.
Productos Relacionados
Bibliografía
Ver todas las 23 bibliografías: Citation Explorer
Asparagus officinalis combined with paclitaxel exhibited synergistic anti-tumor activity in paclitaxel-sensitive and-resistant ovarian cancer cells
Authors: Zhang, Xin and Wang, Jiandong and Fan, Yali and Zhao, Ziyi and Paraghamian, Sarah E and Hawkins, Gabrielle M and Buckingham, Lindsey and O’Donnell, Jillian and Hao, Tianran and Suo, Hongyan and others,
Journal: Journal of Cancer Research and Clinical Oncology (2022): 1–13
An{\’a}lise da estrutura tridimensional, especificidade e atividade antic{\^a}ncer da lectina Canavalia villosa (Benth)
Authors: L{\’o}ssio, Cl{\’a}udia Figueiredo
Journal: (2021)
Changes in Apoptotic Pathways in MOLM-13 Cell Lines after Induction of Resistance to Hypomethylating Agents
Authors: Janotka, L’ubo{\v{s}} and Messingerov{\’a}, Lucia and {\v{S}}imoni{\v{c}}ov{\’a}, Krist{\’\i}na and Kavcov{\’a}, Helena and Elefantov{\’a}, Katar{\’\i}na and Sulov{\’a}, Zdena and Breier, Albert
Journal: International journal of molecular sciences (2021): 2076
Hypertonicity-enforced BCL-2 addiction unleashes the cytotoxic potential of death receptors
Authors: Sirtl, Simon and Knoll, Gertrud and Trinh, Dieu Thuy and Lang, Isabell and Siegmund, Daniela and Gross, Stefanie and Schuler-Thurner, Beatrice and Neubert, Patrick and Jantsch, Jonathan and Wajant, Harald and others,
Journal: Oncogene (2018): 4122–4136
Hypertonicity-imposed BCL-XL addiction primes colorectal cancer cells for death
Authors: Heimer, Sina and Knoll, Gertrud and Steixner, Charlotte and Calance, Diana Nicoleta and Trinh, Dieu Thuy and Ehrenschwender, Martin
Journal: Cancer Letters (2018)
Sialic acid-binding lectin from bullfrog eggs inhibits human malignant mesothelioma cell growth in vitro and in vivo
Authors: Tatsuta, Takeo and Satoh, Toshiyuki and Sugawara, Shigeki and Hara, Akiyoshi and Hosono, Masahiro
Journal: PloS one (2018): e0190653
Role of lincRNA-p21 in the protective effect of macrophage inhibition factor against hypoxia/serum deprivation-induced apoptosis in mesenchymal stem cells
Authors: Xia, Wenzheng and Zhuang, Lei and Hou, Meng
Journal: International journal of molecular medicine (2018)
Helicobacter pylori secreted protein HP1286 triggers apoptosis in macrophages via TNF-independent and ERK MAPK-dependent pathways
Authors: Tavares, Raquel and Pathak, Sushil Kumar
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58
Hyperosmotic stress enhances cytotoxicity of SMAC mimetics
Authors: Bittner, Sebastian and Knoll, Gertrud and Ehrenschwender, Martin
Journal: Cell death \& disease (2017): e2967–e2967
Promotion of osteointegration under diabetic conditions by tantalum coating-based surface modification on 3-dimensional printed porous titanium implants
Authors: Wang, Lin and Hu, Xiaofan and Ma, Xiangyu and Ma, Zhensheng and Zhang, Yang and Lu, Yizhao and Li, Xiang and Lei, Wei and Feng, Yafei
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2016): 440–452
Application notes (en Ingles)
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
Annexin V
Calcein
Human High Temperature Requirement Serine Protease A1 (HTRA1) Degrades Tau Protein Aggregates
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides