Kit de ensayo Cell Meter™ *Colores de fluorescencia triple* en particular está diseñado para monitorear simultáneamente la activación de cuatro caspasas clave (caspasa-3/7, 8 y 9) involucradas en la apoptosis celular
Descripción
Kit de ensayo de actividad de caspasa multiplexada 3/7, 8 y 9 de Cell Meter™ Colores de triple fluorescencia
Nuestros kits de ensayo Cell Meter™ son un conjunto de herramientas para monitorear la viabilidad celular. Hay una variedad de parámetros que se pueden usar para monitorear la viabilidad celular.
La activación de caspasas es ampliamente aceptada como un indicador fiable de la apoptosis celular. Este kit en particular está diseñado para monitorear simultáneamente la activación de cuatro caspasas clave (caspasa-3/7, 8 y 9) involucradas en la apoptosis celular usando tres colores fluorescentes distintos. Utiliza DEVD-ProRed™, IETD-R110 y LEHD-AMC como indicadores fluorogénicos para la actividad de caspasa 3/7, 8 y 9 respectivamente. Tras la escisión de caspasa, los sustratos de caspasa DEVD-ProRed™, IETD-R110 y LEHD-AMC generan tres fluoróforos distintos: ProRed™ (fluorescencia roja), R110 (fluorescencia verde) y AMC (fluorescencia azul), que se pueden monitorear fácilmente en un solo ensayo debido a su buena separación espectral.
Nombre en ingles: Cell Meter™ Multiplexing Caspase 3/7, 8 and 9 Activity Assay Kit *Triple Fluorescence Colors*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| 22820 | Kit de ensayo Cell Meter™ de actividad de caspasa multiplexada 3/7, 8 y 9 Colores de triple fluorescencia | 100 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | Ver Tabla 1 |
| Emisión | Ver Tabla 1 |
| Placa recomendada | Pared negra/Fondo transparente |
| Especificaciones Instrumento | Modo de lectura inferior o superior |
Tabla 1
Longitudes de onda espectrales para Caspases 3/7, 8, y 9.
| Caspase | Fluorescence | Excitation | Emission |
| Caspase 3/7 | Red | 535 nm | 620 nm |
| Caspase 8 | Green | 490 nm | 525 nm |
| Caspase 9 | Blue | 370 nm | 450 nm |
Componentes
| Componente A: Caspase 3/7 Substrate (DEVD-ProRed™, 200X ) | 1 vial (50 µL/vial) |
| Componente B: Caspase 8 Substrate (IETD-R110, 200X) | 1 vial (50 µL/vial) |
| Componente C: Caspase 9 Substrate (LEHD-AMC, 200X) | 1 vial (50 µL/vial) |
| Componente D: Buffer de ensayo | 1 botella (30 mL) |
Preparación de solución de trabajo
- Solución de trabajo de actividad de caspasa única
Prepare una solución de trabajo de caspasa 3/7, caspasa 8 o caspasa 9 agregando 50 µl de sustrato (componente A, B o C) en 10 ml de buffer de ensayo (componente D) y mézclelos bien.
- Solución de trabajo de actividad dual o tricaspasa:
Agregue 50 µl de cada sustrato de caspasa interesado en 10 ml de buffer de ensayo (componente D) para formar la solución de trabajo. Nota: Prepare las soluciones de sustrato probadas y el volumen necesario proporcionalmente.
Para conocer guias sobre la preparación de muestras de células, visite: https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. Detección de actividades de caspasa en células Jurkat. Se sembraron células Jurkat el mismo día a razón de 200.000 células/pocillo en una placa de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente. Las células se trataron con estaurosporina a la concentración final de 1 mM durante 4 horas (barra roja), mientras que las células no tratadas se usaron como control (barra azul).
Se añadió la solución de carga de ensayo de caspasa única (100 uL/pocillo) (en el n.° 1 para caspasa 3/7, n.° 2 para caspasa 8 o n.° 3 para caspasa 9) o solución de carga de ensayo de triple caspasa (n.° 4 para caspasa 3 /7, 8 y 9 juntos) y se incubó a temperatura ambiente durante 1 hora. La intensidad de la fluorescencia se midió con el lector de microplacas de fluorescencia FlexStation a la longitud de onda indicada. Las actividades de las caspasas 3/7, 8 y 9 se pueden detectar en un solo ensayo sin interferencias de otras caspasas.
Figura 2. Apoptosis inducida por cSBL en células H2452 y MSTO mediante la activación de la vía de la caspasa. La activación de caspasa-3, -8 y -9 se detectó mediante transferencia Western (A, B) o fluorometría (C, D). Esta fluorometría se realizó de forma independiente tres veces y los datos se expresan como la media ± SD.
La significación estadística de estos experimentos en comparación con el control se muestra a continuación: *P<0,05, **P<0,01, ***P<0,001. Fuente: La lectina que se une al ácido siálico de los huevos de rana toro inhibe el crecimiento de células de mesotelioma maligno humano in vitro e in vivo por Tatsuta T et al., PLOS, enero de 2018.
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Bibliografía
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