Tinte en gel Gelite™ Safe se ha desarrollado específicamente para ser menos peligroso que EtBr para teñir ADN en geles de agarosa y acrilamida con una sensibilidad mucho mayor.
Descripción
Tinte en gel Gelite™ Safe DNA, Solución de agua 10,000X
AAT Bioquest se compromete a diseñar nuestros productos para que sean respetuosos con el medio ambiente. Es parte de cómo permitimos a nuestros clientes hacer que el mundo sea más saludable, más limpio y más seguro.
El bromuro de etidio (EtBr) se ha utilizado habitualmente como colorante de ADN durante muchos años. Sin embargo, el EtBr es perjudicial si se ingiere y muy tóxico si se inhala. Se ha demostrado que EtBr es mutagénico en varias pruebas y es una toxina acuática. SYBR® Safe se introdujo como una alternativa más segura a EtBr y SYBR® Green, pero desafortunadamente, es mucho menos sensible que SYBR® Green. Sólo tiene una sensibilidad comparable a la del EtBr.
Gelite™ Safe se ha desarrollado específicamente para ser menos peligroso que EtBr para teñir ADN en geles de agarosa y acrilamida con una sensibilidad mucho mayor. Gelite™ Safe ha mejorado enormemente la seguridad y la sensibilidad sin concesiones. La sensibilidad excepcional y la fuerte afinidad de unión al ADN de Gelite™ Safe permiten teñir el ADN antes o después de la electroforesis sin decolorar.
Además de sus propiedades de unión superiores, Gelite™ Safe es esencialmente no fluorescente en ausencia de ácidos nucleicos que muestran una fluorescencia de fondo muy baja. Al unirse a los ácidos nucleicos, Gelite™ Safe exhibe una mejora considerable de la fluorescencia de varios órdenes de magnitud mayor que la del EtBr. Gelite™ Safe se optimizó para ser compatible con varios instrumentos, incluidos transiluminadores UV y de luz azul, sistemas de documentación en gel y escáneres láser. Es la primera formulación única que se puede utilizar en el canal verde o rojo, según su preferencia.
A diferencia del SYBR® Green, permeable a la membrana, que es altamente tóxico para las células y el medio ambiente, las propiedades impermeables a la membrana de Gelite™ Safe lo convierten en una alternativa mucho más segura y no citotóxica. Además, las pruebas de Ames han confirmado que Gelite™ Safe es significativamente menos mutagénico que EtBr y SYBR® Green, incluso en concentraciones muy superiores a la concentración de trabajo utilizada para la tinción en gel.
La prueba de mutagenicidad de Ames se realizó de manera dependiente de la dosis para todos los colorantes de prueba pretratados con una fracción S9 de hígado de rata (SYBR® es una marca comercial de ThermoFisher).
Nombre en ingles: Gelite™ Safe DNA Gel Stain *10,000X Water Solution*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-17700 | Tinte en gel Gelite™ Safe DNA Solución de agua 10,000X | 100 ul |
| AAT-17701 | Tinte en gel Gelite™ Safe DNA Solución de agua 10,000X | 500 ul |
| AAT-17702 | Tinte en gel Gelite™ Safe DNA Solución de agua 10,000X | 1 ml |
| AAT-17703 | Tinte en gel Gelite™ Safe DNA Solución de agua 10,000X | 10 ml |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Temperatura ambiente (10-25 °C); Minimizar la exposición a la luz.
Plataforma
Generador de imágenes en gel
| Excitación | UV Transiluminador/Blue laser |
| Emisión | SYBR® filter, GelStar® filter, GelGreen® filter, o GelRed® filter |
Preparación de Solución de Trabajo
Gelite™ Safe
Prepare una solución de trabajo 1X Gelite™ Safe diluyendo el reactivo madre 10.000X con un buffer de su elección en un rango de pH de 7,5 a 8,5 (por ejemplo, TAE, TBE o TE, preferiblemente pH 8,2).
Nota: Las soluciones de tinción preparadas en agua son menos estables que las preparadas en buffer y deben usarse dentro de las 24 horas para garantizar la máxima sensibilidad a la tinción.
Espectro
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Propiedades espectrales
| Excitación (nm) | 509 |
| Emisión (nm) | 552 |
| Absorbancia | 509 |
Imagen
Figura 1. Comparación de la detección de ADN en gel de agarosa al 1 % en tampón TBE utilizando Gelite™ Safe, EtBr y SYBR® Safe. Se cargaron diluciones en serie dobles de escalera de ADN de 1 kb en cantidades de 100 ng, 50 ng y 25 ng de izquierda a derecha. Los geles se tiñeron durante 60 minutos con Gelite™ Safe, EtBr y SYBR® Safe según las concentraciones recomendadas por el fabricante y se tomaron imágenes utilizando el sistema de imágenes ChemiDoc™ (Bio-Rad®). Los geles se iluminaron utilizando un transiluminador de 300 nm equipado con un filtro GelGreen.
Figura 2. Comparación de Gelite™ Safe (dilución 1:25.000X) y GelRed® (dilución 1:10.000X) en tinción de gel prefabricado utilizando gel de agarosa al 1 % en buffer TBE. Se cargaron diluciones en serie dobles de escalera de ADN de 1 kb en cantidades de 100 ng, 50 ng, 25 ng, 12 ng, 6 ng, 3 ng, 1,5 ng y 0,7 ng de izquierda a derecha. Se tomaron imágenes de los geles utilizando un transiluminador de 300 nm en ChemiDoc™ Imaging System (Bio-Rad®).
Figura 3. Prueba de estabilidad de Gelite™ Safe DNA Gel Stain, que se disolvió en agua y se almacenó a cuatro temperaturas diferentes (-20 °C, 4 °C, temperatura ambiente y 37 °C) durante un período de un mes. Después del almacenamiento, las escaleras de ADN (100, 50 y 25 ng) se cargaron en gel de agarosa al 1 % durante 60 minutos a 75 V. Los geles se incubaron con Gelite™ Safe DNA Gel Stain durante 1 hora. La imagen fue capturada con el conjunto de filtros verdes SYBR (tiempo de exposición = 1.5 segundos).
Figura 4. Prueba de estabilidad de Gelite™ Safe DNA Gel Stain, que se disolvió en agua y se almacenó a cuatro temperaturas diferentes (-20 °C, 4 °C, temperatura ambiente y 37 °C) durante un período de tres meses. Después del almacenamiento, las escaleras de ADN (100, 50 y 25 ng) se cargaron en gel de agarosa al 1 % durante 60 minutos a 75 V. Los geles se incubaron con Gelite™ Safe DNA Gel Stain durante 1 hora. La imagen fue capturada con el conjunto de filtros verdes SYBR (tiempo de exposición = 1,5 segundos).
Figura 5. Comparación de la detección de ADN en gel de agarosa al 1% en tampón TBE usando Gelite™ Safe y GelRed®. Se cargaron diluciones en serie dobles de escalera de ADN de 1 kb en cantidades de 100 ng, 50 ng y 25 ng de izquierda a derecha. Los geles se tiñeron durante 60 minutos con Gelite™ Safe y GelRed™ (Biotium) según las concentraciones recomendadas por el fabricante y se tomaron imágenes utilizando el sistema de imágenes ChemiDoc™ (Bio-Rad®). Los geles se iluminaron utilizando un transiluminador de 300 nm equipado con un juego de filtros EtBr.
Figura 6. Comparación de la detección de ADN en gel de agarosa al 1 % en buffer TBE utilizando Gelite™ Safe, SYBR® Safe y EtBr. Se cargaron diluciones en serie dobles de escalera de ADN de 1 kb en cantidades de 86 ng, 43 ng, 21,5 ng, 10,7 ng, 5,3 ng, 2,6 ng, 1,3 ng y 0,5 ng de izquierda a derecha. Se tomaron imágenes de los geles utilizando un transiluminador de 300 nm en ChemiDoc™ Imaging System (Bio-Rad®).
Figura 7. Resumen de los resultados de la prueba de Ames. La prueba de mutagenicidad de Ames se realizó de manera dependiente de la dosis para Gelite™ Safe, SYBR® Green y EtBr. Las muestras se trataron previamente con un extracto de hígado de fracción S9 y luego se analizaron. Con la cepa TA1538 de S. Typhimurium, un aumento en los revertidos de más del doble con respecto al fondo indica un resultado positivo de mutagenicidad.
Formatos Alternativos
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Referencias
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Referencias
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