El kit de ensayo fluorométrico de captación de ácidos grasos Screen Quest™ proporciona un método simple y sensible para la medición de la captación de ácidos grasos en células que contienen transportadores de ácidos grasos.
Descripción
La captación de ácidos grasos es un objetivo terapéutico importante para el tratamiento de muchas enfermedades humanas como la obesidad, la diabetes tipo 2 y la esteatosis hepática. El kit de ensayo fluorométrico de captación de ácidos grasos Screen Quest™ proporciona un método simple y sensible para la medición de la captación de ácidos grasos en células que contienen transportadores de ácidos grasos. El kit utiliza un sustrato de ácido graso fluorescente de ácido dodecanoico patentado. Este kit de ensayo de captación de ácidos grasos se puede realizar en cualquier lector de microplacas de fluorescencia con un modo de lectura inferior o canal FITC. El ensayo se puede realizar en placas de microtitulación de 96 pozos o de 384 pozos en un procedimiento simple de mezcla y lectura, y se puede adaptar fácilmente para aplicaciones que requieren alto volumen de detección. Kit para 100 pruebas.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-36385 | Screen Quest™ Fluorimetric Fatty Acid Uptake Assay Kit | 100 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 485 nm |
| Emisión | 515 nm |
| Cutoff | 495 nm |
| Placa recomendada | Pared negra / fondo claro |
| Especificacion instrumento | Modo de lectura inferior |
Componentes
| Componente A: TF2-C12 Fatty Acid | 1 vial (liofilizado) |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (10 mL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución madre de ácidos grasos TF2-C12:
Agregue 20 µL de DMSO (Componente C) al vial de Ácido graso TF2-C12 (Componente A) y mezcle bien. Nota: 20 μL de la solución madre de sustrato de ácido graso fluorescente es suficiente para una placa. La solución madre de sustrato de ácido graso fluorescente no utilizada se puede dividir en alícuotas y almacenar a < -20 oC durante un máximo de dos meses si los tubos se sellan herméticamente y se mantienen alejados de la luz. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Solución de carga de colorantes de ácidos grasos:
Agregue 20 µl de la solución madre de ácidos grasos TF2-C12 a 10 ml de buffer de ensayo (componente B) y mézclelos bien. Nota: 10 ml de solución de carga de colorante de ácidos grasos es suficiente para una placa; prepárelo fresco para cada experimento.
Imagenes
Figura 1. Comparación de la captación de ácidos grasos por adipocitos 3T3-L1 y fibroblastos. Las células se sembraron 50.000 células/100 ml/pozo en placa de 96 pozos con poli-D lisina de fondo transparente/pared negra durante 5 horas, y luego se privaron de suero durante 1 hora. Las células se trataron sin (control) o con insulina (150 nM), y se incubaron a 37 ºC, con CO2 al 5 % durante 30 min. Al final del tiempo de incubación, se añadieron 100 µl de mezcla de ácidos grasos al pozo y se incubó durante otros 60 min. La señal de fluorescencia se midió con un lector de placas FlexStation utilizando el modo de lectura inferior. A – fibroblastos (Control); B – fibroblastos (Insulina); C – adipocitos (Control); D– adipocitos (Insulina).
Bibliografía
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In vitro targeted screening and molecular docking of stilbene, quinones, and flavonoid on 3T3-L1 pre-adipocytes for anti-adipogenic actions
Authors: Bedi, Onkar and Aggarwal, Savera and Trehanpati, Nirupma and Ramakrishna, Gayatri and Grewal, Ajmer Singh and Krishan, Pawan
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Referencias
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Emerging risk factors for postpartum depression: serotonin transporter genotype and omega-3 fatty acid status
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Munc18c provides stimulus-selective regulation of GLUT4 but not fatty acid transporter trafficking in skeletal muscle
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Improved working memory but no effect on striatal vesicular monoamine transporter type 2 after omega-3 polyunsaturated fatty acid supplementation
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A mixed polyunsaturated fatty acid diet normalizes hippocampal neurogenesis and reduces anxiety in serotonin transporter knockout rats
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Absence of fatty acid transporter CD36 protects against Western-type diet-related cardiac dysfunction following pressure overload in mice
Authors: Steinbusch LK, Luiken JJ, Vlasblom R, Chabowski A, Hoebers NT, Coumans WA, Vroegrijk IO, Voshol PJ, Ouwens DM, Glatz JF, Diamant M.
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Melittin stimulates fatty acid release through non-phospholipase-mediated mechanisms and interacts with the dopamine transporter and other membrane-spanning proteins
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Fatty acid- and cholesterol transporter protein expression along the human intestinal tract
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Journal: PLoS One (2010): e10380
Application Notes (en Ingles)
A New Red Fluorescent & Robust Screen Quest™ Rhod-4™ Ca2+Indicator for Screening GPCR & Ca2+ Channel Targets
A New Robust No-Wash FLIPR Calcium Assay Kit for Screening GPCR and Calcium Channel Targets
A Non-Radioactive Photometric Assay for Glucose Uptake in Insulin-Responsive 3T3-L1 Adipocytes
A Novel NO Wash Probeniceid-Free Calcium Assay for Functional Analysis of GPCR and Calcium Channel Targets
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