Kit de ensayo de calcio sin lavado Screen Quest™ Fluo-8. Este kit proporciona un ensayo homogéneo basado en fluorescencia para detectar la movilización de calcio intracelular.
Descripción
Los ensayos de flujo de calcio son métodos preferidos en el descubrimiento de fármacos para la detección de receptores acoplados a proteína G (GPCR). El kit de ensayo de calcio Screen Quest™ Fluo-8 NW proporciona un ensayo homogéneo basado en fluorescencia para detectar la movilización de calcio intracelular. Las células que expresan un GPCR de interés que emite señales a través del calcio están precargadas con nuestro Fluo-8 NW patentado que puede atravesar la membrana celular.
Fluo-8 NW es el indicador de calcio más brillante disponible para la detección de HTS. Una vez dentro de la célula, los grupos bloqueadores lipofílicos de Fluo-8 AM son escindidos por esterasa celular no específica, lo que da como resultado un tinte fluorescente con carga negativa que permanece dentro de las células y su fluorescencia aumenta considerablemente al unirse al calcio. Cuando las células se estimulan con compuestos de detección, el receptor señala la liberación de calcio intracelular, lo que aumenta en gran medida la fluorescencia de Fluo-8 NW. Las características de su longitud de onda larga, alta sensibilidad y aumentos de fluorescencia de 100 a 250 veces (cuando forma complejos con calcio) hacen de Fluo-8 NW un indicador ideal para la medición de calcio celular.
Este kit de ensayo de calcio Screen Quest Fluo-8 NW proporciona un método de ensayo optimizado para monitorear los receptores acoplados a proteína G (GPCR) y los canales de calcio. El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pozos o de 384 pozos y se puede adaptar fácilmente a la automatización. Disponible en tres diferentes presentaciones: 1 placa, 10 placas o 100 placas.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-36314 | Screen Quest™ Fluo-8 No Wash Calcium Assay Kit | 1 placa |
| AAT-36315 | Screen Quest™ Fluo-8 No Wash Calcium Assay Kit | 10 placas |
| AAT-36316 | Screen Quest™ Fluo-8 No Wash Calcium Assay Kit | 100 placas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Cutoff | 510 nm |
| Placa recomendada | Paredes negras, fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Modo de lectura inferior / Manejo de líquidos programable |
Otros Instrumentos: ArrayScan, FDSS, FLIPR, FlexStation, IN Cell Analyzer, NOVOStar, ViewLux
Componentes
| Componente A: Fluo-8 NW | 10 viales, liofilizados |
| Componente B: 10X Pluronic® F127 Plus | 10 botellas (10ml/botella) |
Espectro
Abrir en Advanced Spectrum Viewer
Propiedades espectrales
| Factor de corrección (260 nm) | 1.076 |
| Factor de corrección (280 nm) | 0.769 |
| Coeficiente de extinción (cm -1 M -1) | 23430 |
| Excitación (nm) | 495 |
| Emisión (nm) | 516 |
| Rendimiento cuántico | 0.161 |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre Fluo-8 NW:
Agregue 20 µL (para Cat. # 36314) o 200 µL (para Cat. # 36315 y # 36316) de DMSO en el vial de Fluo-8 NW (Componente A) y mezcle bien. Nota: 20 μL de solución madre Fluo-8 NW es suficiente para una placa. La solución madre de Fluo-8 NW no utilizada puede dividirse en alícuotas y almacenarse a < -20 oC durante más de un mes si los tubos están sellados herméticamente. Proteger de la luz y evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación. - Buffer de ensayo (1X):
a) Para el Cat. # 36314 (kit de 1 placa) y # 36315 (kit de 10 placas), prepare buffer de ensayo 1X agregando 9 mL de HHBS (Componente C) en 10X Pluronic® F127 Plus (1 mL, Componente B) y mézclelos bien.
b) Para el Cat. # 36316 (kit de 100 placas), prepare buffer de ensayo 1X agregando el frasco completo de 10 X Pluronic® F127 Plus (10 ml, componente B) en 90 ml de buffer HHBS (no incluido en el kit) y mézclelos bien . Nota: 10 ml de buffer de ensayo 1X son suficientes para una placa. Haga alícuotas y almacene el buffer de ensayo 1X no utilizado a < -20 oC. Proteger de la luz y evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Solución de carga de tinte Fluo-8 NW:
Agregue 20 μL de solución madre Fluo-8 NW en 10 mL de buffer de ensayo 1X y mezcle bien. Nota: Esta solución de trabajo es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Para obtener guia sobre la preparación de muestras de células, visite
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. La respuesta a la dosis de carbacol se midió en células HEK-293 con el kit de ensayo de calcio sin lavado Screen Quest™ Fluo-8 y el kit de ensayo de calcio Fluo-4 NW Catalogo # 36324. Se sembraron 40.000 células HEK-293 /100 µl/pozo durante la noche a en una placa de 96 pozos Costar de pared negra/fondo transparente. Las células se incubaron con 100 µL de solución de colorante utilizando el kit de ensayo de calcio Screen Quest™ Fluo-8 No Wash o el kit Fluo-4 NW (según las instrucciones del fabricante) durante 1 hora a temperatura ambiente. NOVOstar (BMG Labtech) añadió carbacol (50 µl/pozo) para alcanzar las concentraciones finales indicadas.
Figura 2. Generación de grandes láminas de tejido cardíaco (L-CTS).
(A) Vista óptima del L-CTS colocado en un plato UpCell de 10 cm. Barra de escala = 1 mm. (B) (C) Calcio transitorio de L-CTS. (B) Imagen representativa de Fluo-8 de L-CTS (ver también video S1) y región de interés (ROI). Aumento ×100. (C) Cambio de intensidad cronológica de Fluo-8. Tenga en cuenta que los tiempos máximos de 4 ROI diferentes son casi iguales cronológicamente. Fuente: Hojas de tejido cardíaco derivadas de células iPS humanas para la restauración funcional de corazones porcinos infartados por Masanosuke Ishigami et al., PLOS, agosto de 2018.
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Bibliografía
Ver todas las 217 bibliografias: Citation Explorer
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Application Notes (en Ingles)
A New Robust No-Wash FLIPR Calcium Assay Kit for Screening GPCR and Calcium Channel Targets
Evaluation of FLIPR Calcium Assays for Screening GPCR and Calcium Channel Targets
A New Robust No-Wash FLIPR Calcium Assay Kit for Screening GPCR and Calcium Channel Targets
Evaluation of FLIPR Calcium Assays for Screening GPCR and Calcium Channel Targets
A New Robust No-Wash FLIPR Calcium Assay Kit for Screening GPCR and Calcium Channel Targets
AssayWise (en Ingles)
Multicolor Intracellular Calcium Detection Probes
Cal-520™ Calcium Indicators
Cal-590™ Calcium Indicators
Cal-630™ Calcium Indicators
Fluo-8® Calcium Indicators