Nuestro kit de ensayo de pirofosfato PhosphoWroks™ proporciona el método espectrofotométrico más sólido para medir el pirofosfato. Este kit se ha utilizado con éxito en la detección de alto rendimiento (HTS).
Descripción
Kit de ensayo de pirofosfato fluorimétrico Fluorescencia Azul
El pirofosfato (PPi) se produce mediante una serie de reacciones bioquímicas, como la hidrólisis de ATP, las polimerizaciones de ADN y ARN, la formación de AMP cíclico por la enzima adenilato ciclasa y la activación enzimática de los ácidos grasos para formar sus ésteres de coenzima A. Nuestro kit de ensayo de pirofosfato PhosphoWroks™ proporciona el método espectrofotométrico más sólido para medir el pirofosfato. Este kit utiliza nuestro sensor de pirofosfato fluorogénico patentado cuya intensidad de fluorescencia depende proporcionalmente de la concentración de pirofosfato.
Nuestro ensayo es mucho más fácil y más robusto que los métodos de pirofosfato de acoplamiento enzimático que requieren al menos dos enzimas para sus detecciones de pirofosfato. El kit proporciona todos los componentes esenciales para el ensayo de pirofosfato.
Este kit se ha utilizado con éxito en la detección de alto rendimiento (HTS). Consulte el descuento especial del paquete a granel de HTS para la detección de más de 10 000 ensayos.
Nombre en ingles: PhosphoWorks™ Fluorimetric Pyrophosphate Assay Kit *Blue Fluorescence*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| 21611 | Kit de ensayo de pirofosfato fluorimétrico Fluorescencia Azul | 200 ensayos |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 316 nm |
| Emisión | 456 nm |
| Cutoff | 420 nm |
| Placa Recomendada | Negro sólido |
Componentes
| Component A: Buffer de ensayo | 1 botella (25 mL) |
| Component B: Sensor PPi | 1 vial (polvo liofilizado) |
| Component C: Estandar de pirofosfato | 1 vial (1 mL, 50 mM) |
| Component D: DMSO | 1 vial (200 µL) |
Preparación de Soluciones de Stock
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre del sensor PPi (200X)
Agregue 50 µl de DMSO (componente D) en el vial del sensor PPi (componente B) para preparar una solución madre del sensor PPi 200X. Proteger de la luz.
Tenga en cuenta que 25 µL de la solución madre del sensor PPi son suficientes para una placa de 96 pocillos. - Solución estándar de pirofosfato (1 mM)
Agregue 10 μl de estándar de pirofosfato 50 mM (componente C) en 490 μl de ddH2O o buffer Hepes 50 mM (pH 7) para preparar una solución estándar de pirofosfato 1 mM.
Preparación de Solución Estándar
Para mayor comodidad, utilice el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/21611
Estándar de pirofosfato
Agregue 50 μL de solución estándar de pirofosfato 1 mM en 450 μL de ddH2O o buffer Hepes 50 mM para obtener una solución estándar de pirofosfato 100 μM (PS7). Tome una solución estándar de pirofosfato 100 μM y realice diluciones en serie 1:3 en ddH2O o buffer Hepes 50 mM para obtener estándares de pirofosfato diluidos en serie (PS6 – PS1).
Preparación de Solución de Trabajo
Agregue 25 μL de solución madre del sensor 200X PPi a 5 mL de buffer de ensayo (componente A) y mezcle bien para obtener una solución de trabajo PPi.
Nota: Debido a la alta sensibilidad de este ensayo a PPi, es importante utilizar reactivos y material de laboratorio sin PPi. DTT ≥ 1 mM aumentará el fondo, MgCl2 ≥ 2 mM disminuirá la respuesta.
Imagen
Figura 1. Las respuestas a la dosis de pirofosfato, ATP y fosfato se midieron con el kit de ensayo de pirofosfato fluorométrico Phospho Works™ en una placa negra sólida de 96 pocillos utilizando un lector de microplacas de fluorescencia.
Formato Alternativo
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Bibliografía
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Referencias
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