Ensayo ideal para una medición más precisa de la concentración de calcio celular en comparación con Fluo-4 de longitud de onda única.
Descripción
Kit de ensayo de calcio sin lavado Screen Quest™ Fura-2
Los ensayos de flujo de calcio son métodos preferidos en el descubrimiento de fármacos para la detección de receptores acoplados a proteína G (GPCR).
Este kit de análisis de calcio radiométrico permite la medición homogénea de los cambios de calcio intracelular causados por la activación de los receptores acoplados a proteína G o los canales de calcio. Las células que expresan un GPCR de interés que emite señales a través del calcio están precargadas con Fura-2 AM que puede atravesar la membrana celular.
Una vez dentro de la célula, los grupos bloqueadores lipofílicos de Fura-2 AM son escindidos por las esterasas, lo que da como resultado un tinte fluorescente cargado negativamente que permanece dentro de las células y su longitud de onda de fluorescencia cambia al azul al unirse al calcio. Cuando las células se estimulan con agonistas, el receptor señala la liberación de calcio intracelular, lo que aumenta en gran medida la intensidad de fluorescencia de Fura-2 en la longitud de onda corta.
Las características radiométricas de Fura-2 hacen de este kit una herramienta ideal para una medición más precisa de la concentración de calcio celular en comparación con Fluo-4 de longitud de onda única. Con una sola adición, el ensayo es fácil de realizar y deseable en un entorno de alto rendimiento.
El ensayo se puede utilizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pocillos o de 384 pocillos y se puede adaptar fácilmente a la automatización.
Nombre en Ingles: Screen Quest™ Fura-2 No Wash Calcium Assay Kit
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-36320 | Kit de ensayo de calcio sin lavado Screen Quest™ Fura-2 | 10 placas |
| AAT-36321 | Kit de ensayo de calcio sin lavado Screen Quest™ Fura-2 | 100 placas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 340/380 nm |
| Emisión | 510 nm |
| Cutoff | 470 nm |
| Placa recomendada | Pared negra / Fondo claro |
| Especificaciones Instrumento | Modo de lectura inferior/Manejo de líquidos programable |
Otros Instrumentos: FDSS, FLIPR, FlexStation
Componentes
| Componente A: Fura-2 AM | 1 viales liofilizados |
| Componente B: 10X Pluronic F127 Plus | 10 botellas (10 mL/botella) |
| Componente C: HHBS (Hanks&x2019; buffer con 20 mM Hepes) | No incluido |
Espectrum
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Propiedades Espectrales
| Excitación (nm) | 336 |
| Emisión (nm) | 505 |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
1. Solución madre Fura-2 AM
Agregue 200 µL de DMSO en el vial de Fura-2 AM (Componente A) y mézclelos bien. Tenga en cuenta que 20 µL de solución madre de Fura-2 AM es suficiente para una placa. La solución madre de Fura-2 AM no utilizada puede dividirse en alícuotas y almacenarse a < -20 oC durante más de un mes si los tubos están sellados herméticamente. Proteger de la luz y evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación.
2. Buffer de ensayo (1X)
Para el Cat. 36320 (kit de 10 placas), prepare buffer de ensayo 1X agregando 9 ml de HHBS (componente C) en Pluronic® F127 Plus 10X (1 ml, componente B) y mézclelos bien). Para el Cat. 36321 (kit de 100 placas), prepare buffer de ensayo 1X agregando 90 ml de HHBS (no incluido) en Pluronic® F127 Plus 10X (10 ml, componente B) y mézclelos bien. Tenga en cuenta que 10 ml de buffer de ensayo 1X es suficiente para una placa. Haga alícuotas y almacene el buffer de ensayo 1X no utilizado a < -20 oC. Proteger de la luz y evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Solución de carga de tinte Fura-2 AM
Agregue 20 μL de solución madre de Fura-2 AM en 10 mL de buffer de ensayo 1X y mezcle bien. Nota: Esta solución de trabajo es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Imagen
Figura 1. Respuesta a la dosis de ATP en células CHO-K1 medida con kit Screen Quest™ Fura-2 No Wash Calcium Assay. Se sembraron células CHO-K1 durante la noche a 40.000 células/100 µl/pocillo en una placa de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente. Las células se incubaron con 100 µl de Screen Quest™ Fura-2 No Wash Calcium Assay Kit durante 1 hora a temperatura ambiente. Se añadió ATP (50 µL/pocillo) mediante una FlexStation (Molecular Devices) para alcanzar las concentraciones finales indicadas.
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Referencias
Ver todas las 119 referencias: Citation Explorer
Calcium imaging of cortical neurons using Fura-2 AM
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