El Kit Colorimétrico de Detección de Endotoxinas Amplite® puede detectar una amplia gama de endotoxinas (desde 1 UE/ml hasta 0,002 UE/ml).
Descripción
Kit Amplite® de detección de endotoxinas colorimétrico
El lipopolisacárido (LPS), también conocido como endotoxina, es el componente principal de las membranas externas de las bacterias Gram-negativas. El LPS es un potente estimulador del sistema inmunitario innato de los vertebrados y puede provocar fiebre, shock séptico y, finalmente, la muerte. También es reconocido como biomarcador para la detección de invasión de patógenos bacterianos y responsable del desarrollo de respuesta inflamatoria y shock endotóxico en casos extremos. La detección de LPS en materiales biológicos, como muestras de proteínas, péptidos o anticuerpos, es una tarea fundamental en la biofabricación y el bioprocesamiento.
El kit colorimétrico de detección de endotoxinas Amplite®™ utiliza Endotoxin Yellow™, un sustrato cromogénico sensible. Endotoxin Yellow™ se puede hidrolizar en presencia de endotoxinas y el lisado de amebocitos de Limulus (LAL), un extracto de células sanguíneas de un cangrejo herradura, para generar un producto de color amarillo intenso. La actividad de la endotoxina es proporcional a la absorbancia del producto amarillo resultante de la hidrólisis de Endotoxin Yellow™.
El kit colorimétrico de detección de endotoxinas Amplite®™ puede detectar una amplia gama de endotoxinas desde 1 UE/ml hasta 0,002 UE/ml.
Nombre en Ingles: Amplite® Colorimetric Endotoxin Detection Kit
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-60007 | Kit Amplite® de detección de endotoxinas colorimétrico | 100 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Absorbancia
| Absorbancia | 498 nm |
| Placa recomendada | Fondo claro |
Componentes
| Componente A: Endotoxin Yellow™ | 1 vial |
| Componente B: Endotoxin-Free Water | 1 botella (25 mL) |
| Componente C: Limulus Amebocyte Lysate | 1 vial |
| Componente D: E.coli Endotoxin Standard | 1 vial (100 EU/mL) |
| Componente E: DMSO | 1 vial |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre 100 X Endotoxin Yellow™
Agregue 50 µL de DMSO en el vial de Endotoxin Yellow™ (Componente A) para preparar una solución madre de Endotoxin Yellow™ 100X.
Nota: Mantener alejado de la luz. - Solución de lisado de amebocitos de Limulus 5X
Agregue 500 µl de agua libre de endotoxinas (componente B) en el vial de lisado de amebocitos de Limulus (componente C) para preparar una solución de lisado de amebocitos de Limulus 5X.
PREPARACION DE SOLUCION DE ESTANDAR
Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/
Solución estándar de endotoxina de E.coli
Agregue 10 µL de solución estándar de endotoxina de E.coli de 100 UE/mL a 990 µL de agua libre de endotoxinas (componente B) para generar una solución estándar de endotoxina de E.coli de 1 UE/mL (ES1). Luego tome 1 EU/mL de solución estándar de endotoxina de E.coli (ES1) y realice diluciones en serie 1:3 en agua libre de endotoxinas (componente B) para obtener estándares de endotoxina de E.coli diluidos en serie (ES2 – ES7).
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
1. Solución de trabajo Endotoxin Yellow™
Agregue 50 µl de solución madre de Endotoxin Yellow™ en 5 ml de agua libre de endotoxinas (componente B) para obtener un volumen total de 5,05 ml de solución de trabajo de Endotoxin Yellow™.
Nota: Prepare la cantidad de solución de trabajo de sustrato de endotoxina según sea necesario. Mantenga la solución de trabajo alejada de la luz.
2. Solución de trabajo de lisado de amebocitos de Limulus (LAL)
Agregue 500 µl de solución madre de lisado de amebocitos de Limulus (LAL) en 2 ml de agua libre de endotoxinas (componente B) para obtener un volumen total de 2,5 ml de solución de trabajo de lisado de amebocitos de Limulus (LAL).
Nota: Prepare la cantidad de solución de trabajo LAL según sea necesario y antes de su uso. Usando la botella o el tubo sin endotoxinas.
Imagen
Figura 1. La respuesta a la dosis de endotoxina de E.coli se midió en una placa totalmente transparente de 96 pocillos utilizando un lector de microplacas Spectrum Max (Molecular Devices) a una DO de 498 nm. Se pueden detectar tan solo 0,001 UE/ml de endotoxina de E.coli con 10 minutos de incubación (n=3).
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Bibliografía
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FAQ
Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?
Can I use Amplite Fluorimetric Glutamic Acid Assay Kit with an absorbance microplate reader?
How are fatty acids activated?
AssayWise
Acetylcholinesterase Quantification
Acetylcholinesterase Assays
Glycerol 3-Phosphate Assays
Catalase Detection
Hydrogen Peroxide Detection