Los indicadores Fluo-3 se utilizan ampliamente en citometría de flujo y microscopía de barrido láser confocal.
Descripción
Indicador de calcio Fluo-3, AM *CAS 121714-22-5*
La medición del calcio es fundamental para numerosas investigaciones biológicas. Las sondas fluorescentes que muestran respuestas espectrales al unirse a Ca2+ han permitido a los investigadores investigar cambios en las concentraciones intracelulares de Ca2+ libre mediante el uso de microscopía de fluorescencia, citometría de flujo, espectroscopia de fluorescencia y lectores de microplacas de fluorescencia.
Fluo-3 y Rhod-2 se utilizan con mayor frecuencia entre los indicadores de calcio excitables por luz visible. Los indicadores Fluo-3 se utilizan ampliamente en citometría de flujo y microscopía de barrido láser confocal.
Más recientemente, Fluo-3, AM se ha utilizado ampliamente en ensayos de detección de alto rendimiento basados en células para ensayos de GPCR funcionales. Fluo-3 es esencialmente no fluorescente a menos que esté unido a Ca2+ y exhibe un rendimiento cuántico al saturar Ca2+ de ~0,14 y una Kd para Ca2+ de 390 nM.
Nombre en Ingles: Fluo-3, AM *CAS 121714-22-5*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-21010 | Indicador de calcio Fluo-3 AM *Grado Ultrapuro* | 1 mg |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento a <-15 °C. Minimizar exposición a la luz. Producto se entrega con geles.
Plataforma
Microscopio de Fluorescencia
| Excitación | FITC |
| Emisión | FITC |
| Placa recomendada | Pared negra / fondo claro |
Lector de microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Cutoff | 515 nm |
| Placa Recomendada | Pared negra / fondo claro |
| Epecificaciones Instrumento | Modo de lectura inferior/Manejo de líquidos programable |
Calculadora
Preparación de solución madre común
Tabla 1. Volumen de DMSO necesario para reconstituir la masa específica de Fluo-3, AM *CAS 121714-22-5* a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es sólo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos adecuados.
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 88.507 µL | 442.537 µL | 885.073 µL | 4.425 mL | 8.851 mL |
| 5 mM | 17.701 µL | 88.507 µL | 177.015 µL | 885.073 µL | 1.77 mL |
| 10 mM | 8.851 µL | 44.254 µL | 88.507 µL | 442.537 µL | 885.073 µL |
Espectro
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Propiedades espectrales
| Coeficiente de Extinción (cm -1 M -1) | 860001 |
| Excitación (nm) | 506 |
| Emisión (nm) | 515 |
| Rendimiento cuántico | 0.151 |
Propiedades físicas
| Constante de disociación (Kd, nM) | 390 |
| Peso Molecular | 1129.85 |
| Solvente | DMSO |
Imagen
Figura 1. Efecto del aumento de [Ca2+]i sobre la localización subcelular de CacyBP/SIP en células SW480 de cáncer de colon. (A) Efecto de diferentes concentraciones de ionomicina sobre la localización de CacyBP/SIP endógena. Las células se trataron con ionomicina durante 30 minutos, seguido de inmunotinción con anti-CacyBP/SIP, y se tomaron imágenes con microscopía confocal. CacyBP/SIP se translocó a la región perinuclear en células SW480. Después de la estimulación con una cantidad creciente de ionomicina (0, 1, 2, 5, 10 μmol/L) durante 30 minutos a 37°C, las células SW480 se fijaron y se inmunotiñeron usando CacyBP/SIP MAb (paneles a, d, g, j , y m), y los núcleos se marcaron con DAPI (paneles b, e, h, k y n). Las imágenes fusionadas se muestran en los paneles c, f, i, l y o. La barra de escala representa 50 μm. (B) La intensidad de la fluorescencia de Ca2+ intracelular libre citosólico en células SW480 tratadas con ionomicina (0, 1, 2, 5, 10 μmol/L). La intensidad de fluorescencia de Fluo-3 en las células SW480 alcanzó una meseta de 5 μmol/L y 10 μmol/L de ionomicina. Se cargaron células SW480 con 20 μmol/l de Fluo-3/AM durante 45 minutos bajo un microscopio confocal (495 nm). La fluorescencia se capturó cada 2 segundos y se registró durante 3 minutos. (C) El gráfico de barras muestra la intensidad intracelular de Fluo-3. La concentración de Ca2+ aumenta con el tratamiento con 2, 5 y 10 μmol/L de ionomicina (***P<0,001). Fuente: El efecto de S100A6 en la translocación nuclear de CacyBP/SIP en células de cáncer de colon por Shanshan Feng et al., PLOS, marzo de 2018.
Figura 2. Análisis de transitorios espontáneos de calcio. (a) Imagen de fluorescencia de Ca2+ de SVF-CM cargados con el indicador Ca2+ fluo-3/AM. (b) Se produjo una onda transitoria de calcio de la célula indicada por una flecha blanca en el panel “a” mediante un programa MATLAB personalizado. Barra de escala = 50 μm. Fuente: Obtención de células similares a cardiomiocitos que laten espontáneamente a partir de fracciones vasculares estromales derivadas de tejido adiposo cultivadas en hidrogeles de gelatina reticulados con enzimas por Yang et al., Scientific Report, febrero de 2017.
Figura 3. Estructura quimica de Fluo-3 AM *CAS 121714-22-5*
Productos alternos (upgrades)
Productos similares
| Nombre | Excitación (nm) | Emisión (nm) | Coeficiente extinción (cm -1 M -1) | Rendimiento cuántico |
| Fluo-3, AM *UltraPure grade* *CAS 121714-22-5* | 506 | 515 | 86,0001 | 0.151 |
| Fluo-3, AM *Bulk package* *CAS 121714-22-5* | 506 | 515 | 86,0001 | 0.151 |
| Fluo-3FF, AM *UltraPure grade* *Cell permeant* | 506 | 515 | 86,0001 | 0.151 |
| Fluo-8H™, AM | 495 | 516 | 23430 | 0.161 |
| Fluo-8L™, AM | 495 | 516 | 23430 | 0.161 |
| Fluo-8FF™, AM | 495 | 516 | 23430 | 0.161 |
| Fluo-5F, AM *Cell permeant* | 494 | 516 | – | – |
| Fluo-5N, AM *Cell permeant* | 494 | 516 | – | – |
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Bibliografia
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Referencias
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Application Notes
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A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
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FAQ
How is cytosolic calcium tested?
How is intracellular calcium measured?
What is a calcium ion?
Are there any calcium indicators that don’t require probenecid (PBC)?
Are there any substitutes for probenecid in calcium assays?
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