El kit de ensayo de actividad de superóxido mitocondrial fluorimétrico Cell Meter™ esta optimizado para lector de microplacas y utiliza nuestro exclusivo indicador de superóxido para cuantificar el nivel de superóxido en células vivas.
Descripción
Ensayo de actividad de superóxido mitocondrial fluorimétrico Cell Meter™ optimizado para lector de microplacas
Las mitocondrias son los principales productores de superóxido celular. La producción de niveles bajos a moderados de superóxido es fundamental para la regulación adecuada de muchos procesos celulares esenciales, incluida la expresión génica, la transducción de señales y la adaptación muscular al entrenamiento de ejercicios de resistencia.
La producción descontrolada de superóxido mitocondrial puede desencadenar un daño oxidativo celular que contribuye a la patogenia de una amplia variedad de trastornos, como el cáncer, las enfermedades cardiovasculares, las enfermedades neurodegenerativas y el envejecimiento. Por lo tanto, la detección de superóxido mitocondrial intracelular es de importancia central para comprender la regulación redox celular adecuada y el impacto de su desregulación en diversas patologías.
El kit de ensayo de actividad de superóxido mitocondrial fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro exclusivo indicador de superóxido para cuantificar el nivel de superóxido en células vivas. MitoROS™ 580 es permeable a las células vivas y puede dirigirse rápida y selectivamente al superóxido en las mitocondrias. Genera fluorescencia roja cuando reacciona con superóxido.
El kit de detección de superóxido intracelular fluorimétrico Cell Meter™ proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar superóxido mitocondrial en células vivas con una hora de incubación. Este kit se puede utilizar para lectores de microplacas de fluorescencia y aplicaciones de microscopía de fluorescencia.
Nombre en Ingles: Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit*Optimized for Microplate Reader*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-22971 | Ensayo de actividad de superóxido mitocondrial fluorimétrico Cell Meter™ optimizado para lector de microplacas | 200 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Citómetro de Flujo
| Excitación | 540 nm |
| Emisión | 590 nm |
| Cutoff | 570 nm |
| Placa recomendada | Pared negra/fondo claro |
| Especificaciones Instrumento | Modo lectura inferior |
Componentes
| Componente A: MitoROS™ 580 | 1 vial |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (20 mL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre de MitoROS™ 580 (500X):
Agregue 50 µL de DMSO (Componente C) en el vial de MitoROS™ 580 (Componente A) y mezcle bien para preparar una solución madre de MitoROS™ 580 500X. Proteger de la luz. Nota: 25 µL de solución madre 500X MitoROS™ 580 es suficiente para 1 placa. Para el almacenamiento, selle los tubos herméticamente.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 25 μL de solución madre de MitoROS™ 580 500X en 10 mL de Buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo de MitoROS™ 580. Nota: Esta solución de trabajo MitoROS™ 580 es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Para mayor información acerca de la preparación de muestras de células, visite: https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. Imágenes de fluorescencia de la medición de superóxido en células HeLa utilizando el kit de detección de superóxido intracelular fluorimétrico Cell Meter™ (n.° de cat. 22971). Se sembraron células HeLa a 100.000 células/pocillo/100 µl durante la noche en una placa de fondo transparente/pared negra de 96 pocillos. Tratamiento con AMA: las células se trataron con antimicina A (AMA) 50 µM a 37 °C durante 30 minutos y luego se incubaron con MitoROS™ 580 durante 1 hora. Control no tratado: las células HeLa se incubaron con MitoROS™ 580 a 37 °C durante 1 hora sin tratamiento con AMA. La señal de fluorescencia se midió utilizando un microscopio de fluorescencia con un filtro TRITC.
Figura 2. Detección de superóxido intracelular en células HeLa utilizando el kit de detección de superóxido intracelular fluorimétrico Cell Meter™ (n.° de catálogo 22971). Se sembraron células HeLa a 100.000 células/pocillo/100 µl durante la noche en una placa de fondo transparente/pared negra de 96 pocillos. Las células se incubaron con piocianina (Pyo) 50 µM; Antimicina A (AMA) 50 µM o sin tratamiento (Control) a 37 ºC durante 30 minutos. A continuación, las células se incubaron con MitoROS™ 580 a 37 ºC durante 1 hora. La señal de fluorescencia se controló a Ex/Em = 540/590 nm (corte = 570 nm) con modo de lectura inferior utilizando un lector de microplacas CLARIOstar (BMG Labtech).
Productos Alternativos
ats
| Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit *Green Fluorescence* |
| Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit*Optimized for Flow Cytometry* |
Productos Relacionados
Bibliografias
GRP75-faciliated Mitochondria-associated ER Membrane (MAM) Integrity controls Cisplatin-resistance in Ovarian Cancer Patients
Authors: Li, Jing and Qi, Fangzheng and Su, Huishan and Zhang, Chuanshan and Zhang, Qing and Chen, Ying and Chen, Ping and Su, Linjia and Chen, Yanan and Yang, Yuqi and others,
Journal: International journal of biological sciences (2022): 2914
High-glucose-induced apoptosis, ROS production and pro-inflammatory response in cardiomyocytes is attenuated by metformin treatment via PP2A activation
Authors: Cheng, Gang and Li, Lihuan
Journal: Journal of Biosciences (2020): 1–11
Effect of antioxidants on the H2O2-induced premature senescence of human fibroblasts
Authors: Pie{\’n}kowska, Natalia and Bartosz, Grzegorz and Pichla, Monika and Grzesik-Pietrasiewicz, Michalina and Gruchala, Martyna and Sadowska-Bartosz, Izabela
Journal: Aging (Albany NY) (2020): 1910
Nitroxide Radical-Containing Redox Nanoparticles Protect Neuroblastoma SH-SY5Y Cells against 6-Hydroxydopamine Toxicity
Authors: Pichla, Monika and Pulaski, {\L}ukasz and Kania, Katarzyna Dominika and Stefaniuk, Ireneusz and Cieniek, Bogumi{\l} and Pie{\’n}kowska, Natalia and Bartosz, Grzegorz and Sadowska-Bartosz, Izabela
Journal: Oxidative Medicine and Cellular Longevity (2020)
Referencias
Ver todas las 60 referencias: Citation Explorer
Concentration-dependent effect of sodium hypochlorite on stem cells of apical papilla survival and differentiation
Authors: Martin DE, De Almeida JF, Henry MA, Khaing ZZ, Schmidt CE, Teixeira FB, Diogenes A.
Journal: J Endod (2014): 51
Effect of hypochlorite oxidation on cholinesterase-inhibition assay of acetonitrile extracts from fruits and vegetables for monitoring traces of organophosphate pesticides
Authors: Kitamura K, Maruyama K, Hamano S, Kishi T, Kawakami T, Takahashi Y, Onodera S.
Journal: J Toxicol Sci (2014): 71
Green synthesis of carbon dots with down- and up-conversion fluorescent properties for sensitive detection of hypochlorite with a dual-readout assay
Authors: Yin B, Deng J, Peng X, Long Q, Zhao J, Lu Q, Chen Q, Li H, Tang H, Zhang Y, Yao S.
Journal: Analyst (2013): 6551
Comparative antimicrobial activities of aerosolized sodium hypochlorite, chlorine dioxide, and electrochemically activated solutions evaluated using a novel standardized assay
Authors: Thorn RM, Robinson GM, Reynolds DM.
Journal: Antimicrob Agents Chemother (2013): 2216
Analysis of the germination kinetics of individual Bacillus subtilis spores treated with hydrogen peroxide or sodium hypochlorite
Authors: Setlow B, Yu J, Li YQ, Setlow P.
Journal: Lett Appl Microbiol (2013): 259
A simple yet effective chromogenic reagent for the rapid estimation of bromate and hypochlorite in drinking water
Authors: Zhang J, Yang X.
Journal: Analyst (2013): 434
Effect of hypochlorite-based disinfectants on inactivation of murine norovirus and attempt to eliminate or prevent infection in mice by addition to drinking water
Authors: Takimoto K, Taharaguchi M, Sakai K, Takagi H, Tohya Y, Yamada YK.
Journal: Exp Anim (2013): 237
Use of pyrogallol red and pyranine as probes to evaluate antioxidant capacities towards hypochlorite
Authors: Perez-Cruz F, Cortes C, Atala E, Bohle P, Valenzuela F, Olea-Azar C, Speisky H, Aspee A, Lissi E, Lopez-Alarcon C, Bridi R.
Journal: Molecules (2013): 1638
Enhancement of anti-cholinesterase activity of aqueous samples by hypochlorite oxidation for monitoring traces of organophosphorus pesticides in water
Authors: Kanno A, Kawakami T, Takahashi Y, Onodera S.
Journal: J Toxicol Sci (2012): 389
Colorimetric determination of hypochlorite with unmodified gold nanoparticles through the oxidation of a stabilizer thiol compound
Authors: Zhang J, Wang X, Yang X.
Journal: Analyst (2012): 2806
Application Notes
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
A Comparison of Fluorescent Red Calcium Indicators for Detecting Intracellular Calcium Mobilization in CHO Cells
A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Red Fluorescent & Robust Screen Quest™ Rhod-4™ Ca2+Indicator for Screening GPCR & Ca2+ Channel Targets
FAQ
ROS Detection: ROS probe selection guide.
Are NADH and ROS related?
Are there any alternatives for ethidium bromide in agarose gels?
Are there any alternatives to Cy5?
Are there any calcium indicators that don’t require probenecid (PBC)?
AssayWise
Selecting the right ROS probe
Selective Probes for Studying Mitochondrial Functionality
Intracellular Nitric Oxide (NO) Assays
Intracellular Total ROS Activity Assays
Multicolor Intracellular Calcium Detection Probes