Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™

actividad de ROS

Este kit de Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ de fluorescencia verde proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar ROS intracelular en células vivas con una hora de incubación. 

Descripción

Kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ Fluorescencia verde

Las especies reactivas de oxígeno (ROS) son subproductos naturales del metabolismo normal del oxígeno y juegan un papel importante en la señalización celular. Sin embargo, durante los estados relacionados con el estrés oxidativo, los niveles de ROS pueden aumentar drásticamente.

La acumulación de ROS da como resultado un daño significativo a las estructuras celulares. El papel del estrés oxidativo en las enfermedades cardiovasculares, la diabetes, la osteoporosis, los accidentes cerebrovasculares, las enfermedades inflamatorias, una serie de enfermedades neurodegenerativas y el cáncer ha sido bien establecido. La medición de ROS ayudará a determinar cómo el estrés oxidativo modula diversas vías intracelulares.

El kit de ensayo de ROS fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro exclusivo sensor de ROS para cuantificar ROS en células vivas. ROS Green es permeable a las células. Genera la fluorescencia verde cuando reacciona con ROS. El kit es un formato de ensayo optimizado de “mezclar y leer” que es compatible con los instrumentos de manejo de líquidos HTS. El kit de ensayo de ROS fluorimétrico Cell Meter™ proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar ROS intracelular en células vivas con una hora de incubación.

El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pocillos o de 384 pocillos y se puede adaptar fácilmente a la automatización sin un paso de separación. Su señal se puede leer fácilmente utilizando un lector de microplacas de fluorescencia o un microscopio de fluorescencia.

Nombre en Ingles: Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Green Fluorescence*

CatalogoProductoPresentación
AAT-22900Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™200 ensayos

Importante: Solo para uso en investigación (RUO).

Plataforma

Lector de Microplacas de Flourescencia

Excitación590 nm
Emisión525 nm
Cutoff515 nm
Placa RecomendadaParedes negras / fondo claro
Especificaciones InstrumentoModo de lectura inferior

Microscopio de Flourescencia

ExcitaciónFiltro TRITC
EmisiónFiltro TRITC
Especificaciones InstrumentoParedes negras / fondo claro

Componentes

Componente A: ROS Brite™ Green1 vial
Componente B: Buffer de ensayo1 botella (20ml)
Componente C: DMSO1 vial (200 µL)

Preparación de Solución de Stock

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

Solución madre Amplite™ ROS Green (500X):
Agregue 40 µL de DMSO (Componente C) en el vial de Amplite™ ROS Green (Componente A) y mezcle bien para preparar una solución madre de Amplite™ ROS Green 500X. Proteger de la luz. Nota: 20 µL de solución madre 500X Amplite™ ROS Green es suficiente para 1 placa. Para el almacenamiento, selle los tubos herméticamente.


Preparación de Solución de Trabajo

Agregue 20 µL de solución madre 500X Amplite™ ROS Green en 10 mL de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo Amplite™ ROS Green. Nota: Esta solución de trabajo Amplite™ ROS Green es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.


Preparación de células

Para guias sobre la preparación de muestras de células, visite https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

Imagenes

Figura 1.Imágenes de fluorescencia de detección simultánea de óxido nítrico intracelular (NO) y ROS total en macrófagos RAW 264.7. Las células se tiñeron conjuntamente con Nitrixyte™ Orange (Rojo) y Amplite® ROS Green (Verde). A continuación, las células se trataron con o sin 20 µg/ml de lipopolisacárido (LPS), L-arginina (L-Arg) 1 mM y piocianina (Pyo) 50 µM a 37 °C durante 16 horas. Las señales de fluorescencia se midieron utilizando un microscopio de fluorescencia equipado con juegos de filtros TRITC (Nitrixyte™ Orange, Red) y FITC (Amplite® ROS Green, Green), simultáneamente.

Figura 2. Detección de ROS en células Jurkat con el kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™. Se sembraron células Jurkat el mismo día a 300.000 células/100 µl/pocillo en una placa de 96 pocillos Costar de pared negra/fondo transparente. Se añadió la solución de carga del ensayo de ROS (100 µl/pocillo) y se incubó en un incubador a 37 °C con CO2 al 5 % durante 1 hora. Y luego las células se trataron con H2O2 1 mM, 0,1 mM o sin H2O2 durante 30 minutos. La señal de fluorescencia se controló a Ex/Em = 490/525 nm (corte a 515 nm) con el modo de lectura inferior utilizando FlexStation (Molecular Devices).

Formatos Alternativos

Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit* Orange Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit* Red Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit* Deep Red Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit* Optimized for Flow Cytometry*

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Bibliografía

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Referencias

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Application Notes

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FAQ

ROS Detection: ROS probe selection guide.
Are NADH and ROS related?
Are there any alternatives for ethidium bromide in agarose gels?
Are there any alternatives to Cy5?
Are there any calcium indicators that don’t require probenecid (PBC)?

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