Ensayo Colorimétrico Amplite® de NAD y NADH total

ensayo colorimetrico

Kit de ensayo colorimétrico de NAD y NADH total Amplite®. Proporciona un método conveniente para detección sensible de NAD y NADH.

Descripción

Ensayo Colorimétrico Amplite® de NAD y NADH total

El dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD+) y el fosfato de dinucleótido de nicotinamida y adenina (NADP+) son dos cofactores importantes que se encuentran en las células. NADH es la forma reducida de NAD+, y NAD+ es la forma oxidada de NADH. Forma NADP con la adición de un grupo fosfato a la posición 2′ del nucleótido de adenilo a través de un enlace éster.

El NADP se utiliza en reacciones biológicas anabólicas, como la síntesis de ácidos grasos y ácidos nucleicos, que requieren NADPH como agente reductor. En los cloroplastos, el NADP es un agente oxidante importante en las reacciones preliminares de la fotosíntesis. El NADPH producido por la fotosíntesis se usa luego como poder reductor para las reacciones biosintéticas en el ciclo de Calvin de la fotosíntesis.

Los ensayos tradicionales de NAD/NADH y NADP/NADPH se realizan monitoreando la absorción de NADH o NADPH a 340 nm. Este método adolece de baja sensibilidad y alta interferencia ya que el ensayo se realiza en el rango UV que requiere una microplaca de cuarzo costosa. Este kit de ensayo Amplite® NAD/NADH proporciona un método conveniente para la detección sensible de NAD y NADH. Las enzimas del sistema reconocen específicamente NAD/NADH en una reacción de ciclo enzimático. No es necesario purificar NAD/NADH de la mezcla de muestra. La reacción del ciclo enzimático aumenta significativamente la sensibilidad de detección.

Nombre en Ingles: Amplite® Colorimetric Total NAD and NADH Assay Kit

CatalogoProductoPresentación
AAT-15258Kit de ensayo de NAD y NADH total colorimétrico Amplite® 400 pruebas

pdfSDSpdfProtocol

Importante: Solo para uso en investigación (RUO).

Plataforma

Lector de Microplacas de Absorbancia

Absorbancia570/610 nm
Placa recomendadaFondo Claro

Componentes

Componente A: NAD/NADH Recycling Enzyme Mix2 botellas (polvo liofilizado)
Componente B: NADH Buffer sensor1 botella (20 mL)
Componente C: NADH Estandar (FW:709)1 vial (142 µg)

PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

Solución estándar de NADH (1 mM)
Agregue 200 µl de buffer PBS en el vial de estándar de NADH (componente C) para preparar una solución estándar de NADH de 1 mM (1 nmol/µl).


PREPARACION DE SOLUCION DE ESTANDAR

Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/15258

Estandar NADH

Agregue 10 μl de solución madre de NADH 1 mM en 990 μl de buffer PBS (pH 7.4) para generar una solución estándar de NADH 10 μM (NS7). A continuación, realice diluciones en serie 1:3 para obtener estándares de NADH diluidos en serie (NS6 – NS1). Nota: La solución estándar de NADH diluida es inestable y debe usarse dentro de las 4 horas.


PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO

Agregue 10 ml de buffer sensor de NAD/NADH (componente B) a la botella de mezcla de enzimas de reciclaje de NAD/NADH (componente A) y mezcle bien.
Nota: Esta solución de trabajo de NAD/NADH es suficiente para dos placas de 96 pocillos. La solución de trabajo no es estable, utilícela inmediatamente y evite la exposición directa a la luz.

Imagenes

Figura 1. La respuesta a la dosis de NADH se midió con Amplite® Colorimetric Total NAD and NADH Assay Kit en una placa de 96 pocillos de fondo blanco/transparente utilizando un lector de microplacas NOVOStar (BMG Labtech).

Figura 2. PQQ aumenta la concentración de NAD+ celular. (A–D) Los fibroblastos NIH/3T3 se incubaron con las concentraciones indicadas de PQQ durante tiempos que oscilan entre 1 y 15 h (A y B) o durante 6 h (C y D). Después de la incubación, los niveles celulares de NAD+ (A y C) y NAD+ total y NADH (B y D) se midieron y normalizaron al contenido de proteína celular. Los resultados se muestran como medias ± SEM (n ≥ 3). N. S. significa no significativo. **p < 0,01 y ***p < 0,001 frente al control tratado con vehículo (ANOVA, prueba de comparación múltiple de Dunnett). Fuente: Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-Active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating the SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway por Saihara et al., ACS Publications, noviembre de 2017.

Producto Alternativo

Amplite® Colorimetric Total NAD and NADH Assay Kit *Enhanced Sensitivity*

Bibliografía

Ver todas las 63 bibliografias: Citation Explorer

NAD+ Synthetase is Required for Free-living and Symbiotic Nitrogen Fixation in the Actinobacterium Frankia casuarinae
Authors: Kucho, Ken-ichi and Asukai, Koya and Van Nguyen, Thanh
Journal: Microbes and Environments (2023): ME22093

NAD (H)-loaded nanoparticles for efficient sepsis therapy via modulating immune and vascular homeostasis
Authors: Ye, Mingzhou and Zhao, Yi and Wang, Yuyuan and Xie, Ruosen and Tong, Yao and Sauer, John-Demian and Gong, Shaoqin
Journal: Nature Nanotechnology (2022): 1–11

Mycoplasma pneumoniae protects infected epithelial cells from hydrogen peroxide-induced cell detachment
Authors: Yamamoto, Takeshi and Kida, Yutaka and Kuwano, Koichi
Journal: Cellular microbiology (2019): e13015

Enhanced 1, 3-propanediol production in Klebsiella pneumoniae by a combined strategy of strengthening the TCA cycle and weakening the glucose effect
Authors: Lu, Xinyao and Ren, Shunli and Lu, Jingzheng and Zong, Hong and Song, Jian and Zhuge, Bin
Journal: Journal of applied microbiology (2018)

Notoginsenoside R1 attenuates high glucose-induced endothelial damage in rat retinal capillary endothelial cells by modulating the intracellular redox state
Authors: Fan, Chunlan and Qiao, Yuan and Tang, Minke
Journal: Drug design, development and therapy (2017): 3343

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Luo, Gang and Huang, Bingqing and Qiu, Xiang and Xiao, Lin and Wang, Ning and Gao, Qin and Yang, Wei and Hao, Liping
Journal: Molecular Nutrition &amp; Food Research (2017)

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Ling, Min and Huang, Peixin and Islam, Shamima and Heruth, Daniel P and Li, Xuanan and Zhang, Li Qin and Li, Ding-You and Hu, Zhaohui and Ye, Shui Qing
Journal: Cell &amp; Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: Ren, T and Zhang, H and Wang, J and Zhu, J and Jin, M and Wu, Y and Guo, X and Ji, L and Huang, Q and Yang, H and others, undefined
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Zhang, Li Q and Van Ha, undefined and el, Leon and Xiong, Min and Huang, Peixin and Heruth, Daniel P and Bi, Charlie and Gaedigk, Roger and Jiang, Xun and Li, Ding-You and Wyckoff, Gerald and others, undefined
Journal: Cell Death &amp; Disease (2017): e2705

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Yang, Fei and Heit, Caitlin and Inglis, Debra L
Journal: Fermentation (2017): 61

Application Notes

Bio-inspired NADH regeneration by carbon nitride photocatalysis using diatom templates
Direct bioconversion of brown algae into ethanol by thermophilic bacterium Defluviitalea phaphyphila
GAPDH is critical for superior efficacy of female bone marrow-derived mesenchymal stem cells on pulmonary hypertension
Identification of an Annonaceous Acetogenin Mimetic, AA005, as an AMPK Activator and Autophagy Inducer in Colon Cancer Cells
Impaired SIRT1 nucleocytoplasmic shuttling in the senescent heart during ischemic stress

FAQ

My NAD(H) assays have all given me poor results for an extended period of time. What am I doing wrong?
What assay kits measure NAD/NADH from cell samples?
Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?

AssayWise

Selecting the right ROS probe
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