Kit de ensayo colorimétrico de NAD y NADH total Amplite®. Proporciona un método conveniente para detección sensible de NAD y NADH.
Descripción
Ensayo Colorimétrico Amplite® de NAD y NADH total
El dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD+) y el fosfato de dinucleótido de nicotinamida y adenina (NADP+) son dos cofactores importantes que se encuentran en las células. NADH es la forma reducida de NAD+, y NAD+ es la forma oxidada de NADH. Forma NADP con la adición de un grupo fosfato a la posición 2′ del nucleótido de adenilo a través de un enlace éster.
El NADP se utiliza en reacciones biológicas anabólicas, como la síntesis de ácidos grasos y ácidos nucleicos, que requieren NADPH como agente reductor. En los cloroplastos, el NADP es un agente oxidante importante en las reacciones preliminares de la fotosíntesis. El NADPH producido por la fotosíntesis se usa luego como poder reductor para las reacciones biosintéticas en el ciclo de Calvin de la fotosíntesis.
Los ensayos tradicionales de NAD/NADH y NADP/NADPH se realizan monitoreando la absorción de NADH o NADPH a 340 nm. Este método adolece de baja sensibilidad y alta interferencia ya que el ensayo se realiza en el rango UV que requiere una microplaca de cuarzo costosa. Este kit de ensayo Amplite® NAD/NADH proporciona un método conveniente para la detección sensible de NAD y NADH. Las enzimas del sistema reconocen específicamente NAD/NADH en una reacción de ciclo enzimático. No es necesario purificar NAD/NADH de la mezcla de muestra. La reacción del ciclo enzimático aumenta significativamente la sensibilidad de detección.
Nombre en Ingles: Amplite® Colorimetric Total NAD and NADH Assay Kit
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-15258 | Kit de ensayo de NAD y NADH total colorimétrico Amplite® | 400 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Absorbancia
| Absorbancia | 570/610 nm |
| Placa recomendada | Fondo Claro |
Componentes
| Componente A: NAD/NADH Recycling Enzyme Mix | 2 botellas (polvo liofilizado) |
| Componente B: NADH Buffer sensor | 1 botella (20 mL) |
| Componente C: NADH Estandar (FW:709) | 1 vial (142 µg) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución estándar de NADH (1 mM)
Agregue 200 µl de buffer PBS en el vial de estándar de NADH (componente C) para preparar una solución estándar de NADH de 1 mM (1 nmol/µl).
PREPARACION DE SOLUCION DE ESTANDAR
Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/15258
Estandar NADH
Agregue 10 μl de solución madre de NADH 1 mM en 990 μl de buffer PBS (pH 7.4) para generar una solución estándar de NADH 10 μM (NS7). A continuación, realice diluciones en serie 1:3 para obtener estándares de NADH diluidos en serie (NS6 – NS1). Nota: La solución estándar de NADH diluida es inestable y debe usarse dentro de las 4 horas.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 10 ml de buffer sensor de NAD/NADH (componente B) a la botella de mezcla de enzimas de reciclaje de NAD/NADH (componente A) y mezcle bien.
Nota: Esta solución de trabajo de NAD/NADH es suficiente para dos placas de 96 pocillos. La solución de trabajo no es estable, utilícela inmediatamente y evite la exposición directa a la luz.
Imagenes
Figura 1. La respuesta a la dosis de NADH se midió con Amplite® Colorimetric Total NAD and NADH Assay Kit en una placa de 96 pocillos de fondo blanco/transparente utilizando un lector de microplacas NOVOStar (BMG Labtech).
Figura 2. PQQ aumenta la concentración de NAD+ celular. (A–D) Los fibroblastos NIH/3T3 se incubaron con las concentraciones indicadas de PQQ durante tiempos que oscilan entre 1 y 15 h (A y B) o durante 6 h (C y D). Después de la incubación, los niveles celulares de NAD+ (A y C) y NAD+ total y NADH (B y D) se midieron y normalizaron al contenido de proteína celular. Los resultados se muestran como medias ± SEM (n ≥ 3). N. S. significa no significativo. **p < 0,01 y ***p < 0,001 frente al control tratado con vehículo (ANOVA, prueba de comparación múltiple de Dunnett). Fuente: Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-Active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating the SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway por Saihara et al., ACS Publications, noviembre de 2017.
Producto Alternativo
Bibliografía
Ver todas las 63 bibliografias: Citation Explorer
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Application Notes
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FAQ
My NAD(H) assays have all given me poor results for an extended period of time. What am I doing wrong?
What assay kits measure NAD/NADH from cell samples?
Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?
AssayWise
Selecting the right ROS probe
Acetylcholinesterase Quantification
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Glycerol 3-Phosphate Assays
Catalase Detection