Kit de ensayo colorimétrico de NAD y NADH total Amplite® de Sensibilidad Mejorada, roporciona un método conveniente para detección sensible de NAD y NADH.
Descripción
Ensayo Colorimétrico Amplite® de NAD y NADH total Sensibilidad Mejorada
El dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD+) y el fosfato de dinucleótido de nicotinamida y adenina (NADP+) son dos cofactores importantes que se encuentran en las células. NADH es la forma reducida de NAD+, y NAD+ es la forma oxidada de NADH. Forma NADP con la adición de un grupo fosfato a la posición 2′ del nucleótido de adenilo a través de un enlace éster. El NADP se utiliza en reacciones biológicas anabólicas, como la síntesis de ácidos grasos y ácidos nucleicos, que requieren NADPH como agente reductor.
En los cloroplastos, el NADP es un agente oxidante importante en las reacciones preliminares de la fotosíntesis. El NADPH producido por la fotosíntesis se usa luego como poder reductor para las reacciones biosintéticas en el ciclo de Calvin de la fotosíntesis. Los ensayos tradicionales de NAD/NADH y NADP/NADPH se realizan monitoreando la absorción de NADH o NADPH a 340 nm. Este método adolece de baja sensibilidad y alta interferencia ya que el ensayo se realiza en el rango UV que requiere una microplaca de cuarzo costosa.
Este kit de ensayo Amplite® NAD/NADH proporciona un método conveniente para la detección sensible de NAD y NADH. Las enzimas del sistema reconocen específicamente NAD/NADH en una reacción de ciclo enzimático. No es necesario purificar NAD/NADH de la mezcla de muestra. La reacción del ciclo enzimático aumenta significativamente la sensibilidad de detección. En comparación con el Cat.15258, este kit tiene una mayor sensibilidad.
Nombre en Ingles: Amplite® Colorimetric Total NAD and NADH Assay Kit Enhanced Sensitivity
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-15275 | Kit de ensayo de NAD y NADH total colorimétrico Amplite® sensibilidad mejorada | 400 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Absorbancia
| Absorbancia | 460 nm |
| Placa recomendada | Fondo Claro |
Componentes
| Componente A: NAD/NADH Recycling Enzyme Mix | 2 botellas (polvo liofilizado) |
| Componente B-I: NADH Probe | 1 botella (4 mL) |
| Componente B-II: NADH Probe Buffer | 1 botella (16 mL) |
| Componente C: NADH estandar (FW: 709) | 1 vial (142 µg) |
| Componente D: Buffer de lisis | 1 botella (10 mL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución estándar de NADH
Agregue 200 µl de buffer PBS en el vial de estándar de NADH (componente C) para preparar una solución madre de NADH de 1 mM (1 nmol/µl).
PREPARACION DE SOLUCION DE ESTANDAR
Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/15275
Estandar NADH
Agregue 10 μl de solución madre de NADH 1 mM en 990 μl de buffer PBS (pH 7,4) para generar una solución estándar de NADH 10 μM (10 pmols/μl) (NS7). A continuación, tome la solución estándar de NADH de 10 µM y realice diluciones en serie 1:2 para obtener los estándares de NADH diluidos en serie restantes (NS1 – NS6). Nota: La solución estándar de NADH diluida es inestable y debe usarse dentro de las 4 horas.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
1- Agregue 8 ml de buffer de sonda NADH (componente B-II) a la botella de mezcla de enzimas de reciclaje NAD/NADH (componente A) y mezcle bien.
2- Agregue 2 ml de sonda NADH (componente B-I) en la botella anterior (del paso 1) y mezcle bien.
Nota: Esta solución de trabajo de NAD/NADH es suficiente para 200 ensayos. La solución de trabajo no es estable, utilícela inmediatamente y evite la exposición directa a la luz.
Imagenes
Figura 1. La respuesta a la dosis de NADH se midió con el kit de ensayo de NADH y NAD total colorimétrico Amplite® Sensibilidad mejorada en una placa inferior blanca/transparente de 96 pocillos utilizando un lector de microplacas SpectraMax (Molecular Devices).
Producto Alternativo
Producto Adicionales
Kit de ensayo fluorimétrico de NAD y NADH total Amplite® *Fluorescencia roja*
Bibliografía
Ver todas las 61 bibliografias: Citation Explorer
NAD+ Synthetase is Required for Free-living and Symbiotic Nitrogen Fixation in the Actinobacterium Frankia casuarinae
Authors: Kucho, Ken-ichi and Asukai, Koya and Van Nguyen, Thanh
Journal: Microbes and Environments (2023): ME22093
NAD (H)-loaded nanoparticles for efficient sepsis therapy via modulating immune and vascular homeostasis
Authors: Ye, Mingzhou and Zhao, Yi and Wang, Yuyuan and Xie, Ruosen and Tong, Yao and Sauer, John-Demian and Gong, Shaoqin
Journal: Nature Nanotechnology (2022): 1–11
The Linkage of Yeast Metabolites, Produced Under Hyperosmotic Stress, to Cellular Cofactor Systems During Icewine Fermentation.
Authors: Allie, Robert
Journal: (2022)
Enhanced 1, 3-propanediol production in Klebsiella pneumoniae by a combined strategy of strengthening the TCA cycle and weakening the glucose effect
Authors: Lu, Xinyao and Ren, Shunli and Lu, Jingzheng and Zong, Hong and Song, Jian and Zhuge, Bin
Journal: Journal of applied microbiology (2018)
Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Luo, Gang and Huang, Bingqing and Qiu, Xiang and Xiao, Lin and Wang, Ning and Gao, Qin and Yang, Wei and Hao, Liping
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)
Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Ling, Min and Huang, Peixin and Islam, Shamima and Heruth, Daniel P and Li, Xuanan and Zhang, Li Qin and Li, Ding-You and Hu, Zhaohui and Ye, Shui Qing
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27
MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: Ren, T and Zhang, H and Wang, J and Zhu, J and Jin, M and Wu, Y and Guo, X and Ji, L and Huang, Q and Yang, H and others, undefined
Journal: Oncogene (2017)
Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Zhang, Li Q and Van Ha, undefined and el, Leon and Xiong, Min and Huang, Peixin and Heruth, Daniel P and Bi, Charlie and Gaedigk, Roger and Jiang, Xun and Li, Ding-You and Wyckoff, Gerald and others, undefined
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705
Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Yang, Fei and Heit, Caitlin and Inglis, Debra L
Journal: Fermentation (2017): 61
Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Li, Miao and Liu, Xin and He, Yongpeng and Zheng, Qingyin and Wang, Min and Wu, Yu and Zhang, Yuanpeng and Wang, Chaoyun
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133
Application Notes
Bio-inspired NADH regeneration by carbon nitride photocatalysis using diatom templates
Direct bioconversion of brown algae into ethanol by thermophilic bacterium Defluviitalea phaphyphila
GAPDH is critical for superior efficacy of female bone marrow-derived mesenchymal stem cells on pulmonary hypertension
Identification of an Annonaceous Acetogenin Mimetic, AA005, as an AMPK Activator and Autophagy Inducer in Colon Cancer Cells
Impaired SIRT1 nucleocytoplasmic shuttling in the senescent heart during ischemic stress
FAQ
What are the differences between fatty acid synthesis and beta-oxidation?
What assay kits measure NAD/NADH from cell samples?
Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?
AssayWise
Selecting the right ROS probe
Acetylcholinesterase Quantification
Acetylcholinesterase Assays
Glycerol 3-Phosphate Assays
Catalase Detection