Calcein Red AM es una de las sondas fluorescentes más populares que se utilizan para marcar y monitorear las funciones celulares de células vivas.
Descripción
Calcein Red™ AM
Calcein AM es una de las sondas fluorescentes más populares que se utilizan para marcar y monitorear las funciones celulares de células vivas. Sin embargo, el color único de Calcein AM hace imposible utilizar este valioso reactivo en aplicaciones multicolores.
Por ejemplo, es imposible utilizar Calcein AM en combinación de células transfactadas con GFP debido al mismo color que la GFP. Para abordar esta limitación de color de Calcein AM, hemos desarrollado Calcein Orange™, Calcein Red™ y Calcein Deep Red™. Estos nuevos análogos de Calcein AM permiten el etiquetado multicolor y el análisis funcional de células vivas en combinación con Calcein AM.
Calcein Red™ AM no fluorescente puede penetrar fácilmente en las células vivas y se hidroliza para generar el tinte Calcein Red™ fuertemente fluorescente. El tinte Calcein Red™ se puede controlar con el juego de filtros común TRITC/Cy3. AAT Bioquest ofrece Calcein Red™ como tinte de referencia para Calcein Red™ AM.
Nombre en Ingles: Calcein Red™ AM
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-21900 | Calcein Red™ AM | 1 mg |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento a largo plazo: Congelar a < -15 °C. Minimizar la exposición a la luz.
Plataforma
Citómetro de flujo
| Excitación | laser 532/561 nm |
| Emisión | filtro 585/40 nm |
Microscopio de Fluorescencia
| Excitación | Juego de filtros TRITC |
| Emisión | Juego de filtros TRITC |
| Placa recomendada | Pared negra/fondo claro |
Lector de fluorescencia de microplacas
| Excitación | 540 |
| Emisión | 590 |
| Cutoff | 570 |
| Placa recomendada | Pared negra/fondo claro |
| Especificaciones Instrumento | Modo de lectura inferior |
Espectro
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Propiedades Espectrales
| Excitación (nm) | 562 |
| Emisión (nm) | 576 |
Propiedades Fisicas
| Peso Molecular | 1015.79 |
| Solvente | DMSO |
Preparación de Soluciones de Stock
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución madre Calcein Red™ AM
Prepare una solución madre de 2 a 5 mM de Calcein Red™ AM en DMSO anhidro de alta calidad.
Nota El detergente no iónico Pluronic® F-127 se puede utilizar para aumentar la solubilidad acuosa de los ésteres AM. En el tampón de tinción, la concentración final de Pluronic® F-127 debe ser aproximadamente del 0,02 %. Se puede comprar una variedad de productos Pluronic® F-127 en AAT Bioquest. Evite el almacenamiento prolongado de ésteres AM en presencia de Pluronic® F-127.
Preparación de Soluciones de Trabajo
Solución de trabajo Calcein Red™ AM
Prepare una solución de trabajo Calcein Red™ AM de 1 a 10 µM en el tampón de su elección (por ejemplo, tampón Hanks y Hepes). Para la mayoría de las líneas celulares, se recomienda Calcein Red™ AM en una concentración final de 4 a 5 µM. La concentración exacta de indicadores necesarios para la carga celular debe determinarse empíricamente.
Nota Si sus células contienen transportadores de aniones orgánicos, se puede agregar probenecid (1 a 2,5 mM) o sulfinpirazona (0,1 a 0,25 mM) a la solución de trabajo para reducir la fuga de indicadores deesterificados.
Calculadora
Preparación de solución madre común
Tabla 1. Volumen de DMSO necesario para reconstituir la masa específica de Calcein Red™ AM a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es sólo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los tampones experimentales/fisiológicos adecuados.
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 98.446 µL | 492.228 µL | 984.455 µL | 4.922 mL | 9.845 mL |
| 5 mM | 19.689 µL | 98.446 µL | 196.891 µL | 984.455 µL | 1.969 mL |
| 10 mM | 9.845 µL | 49.223 µL | 98.446 µL | 492.228 µL | 984.455 µL |
Imagenes
Figura 1: Imágenes de células Live HeLa teñidas con Calcein Red TM, AM (Cat.21900). Los núcleos celulares se tiñeron con Hoechst 33342 (azul, n.º de catálogo 17535).
Figura 2. Imágenes de células HeLa teñidas con Calcein Red™ AM. Izquierda: células HeLa vivas; Derecha: células HeLa fijas.
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| Name | Excitation (nm) | Emission (nm) |
| Calcein Deep Red™ | 643 | 663 |
| Calcein UltraBlue™ AM | 359 | 458 |
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| Calcein UltraGreen™ AM | 492 | 514 |
| Fura Red, AM *CAS 149732-62-7* | 435 | 639 |
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Bibliografia
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Referencias
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Application notes (en Ingles)
Calcein AM Assay Standardization
Experimental Protocol for Calcein AM Assay
Multi-Color Labeling and Functional Analysis of Live Cells Using Fluorescent Calcein AM Dyes
Multiplexing Cell Proliferation and Cytotoxicity Assays Using Calcein Red and CytoCalceins
Annexin V
FAQ
Is Calcein, AM toxic to cells?
What are common laser lines used in flow cytometry?
Are there any alternatives to BrdU (Bromodeoxyuridine)?
Are there upgraded trypan blue derivatives for cell viability testing?
What does trypan blue do?
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