El derivado de acetometoxi (AM) de la calceína (calceína AM) se usa ampliamente para marcar células vivas, ya que puede transportarse a través de la membrana celular hacia las células vivas.
Descripción
La Calceína AM pasa fácilmente a través de la membrana celular de las células viables debido a su mayor hidrofobicidad en comparación con la Calceína. El derivado de acetometoxi (AM) de la calceína (calceína AM) se usa ampliamente para marcar células vivas, ya que puede transportarse a través de la membrana celular hacia las células vivas. Los grupos éster AM enmascaran la parte de la molécula que quela el calcio. Al transportarse a las células vivas, las esterasas celulares cortan los grupos AM, la molécula se une al calcio dentro de la célula (lo que resulta en la adquisición de una fuerte fluorescencia verde) y queda atrapada en el interior. Como las células muertas carecen de esterasas, solo se marcan las células vivas. Esta característica lo hace muy útil para probar la viabilidad celular y para el marcado de células a corto plazo.
En comparación con otros reactivos de marcado de células vivas (como BCECF-AM y diacetato de carboxifluoresceína), la calceína-AM es la sonda fluorescente más adecuada para teñir células viables debido a su baja citotoxicidad. La calceína no afecta significativamente las funciones celulares como la proliferación o la quimiotaxis de los linfocitos. Además, los ensayos de viabilidad que utilizan calceína son fiables y se correlacionan bien con el ensayo estándar de liberación de 51Cr.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-22002 | Calcein, AM *CAS 148504-34-1* | 1 mg |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Congelar (< -15 °C); Minimizar la exposición a la luz
Plataforma
Citómetro de Flujo
| Excitación de laser | 488 nm |
| Filtro de emisión | 530/30 nm |
| Especificaciones instrumento | FITC channel |
Microscopio de Fluorescencia
| Excitación | FITC |
| Emisión | FITC |
| Placa recomendada | Pared negra, fondo claro |
Lector de microplacas de fluorescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Corte | 515 nm |
| Placa Recomendada | Pared negra, fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Modo de lectura inferior |
Propiedades fisicas
| Peso Molecular | 994.86 |
| Disolvente | DMSO |
Espectro
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Propiedades espectrales
| Coeficiente de extinción (cm -1 M -1) | 81000 |
| Exitación (nm) | 501 |
| Emisión (nm) | 521 |
Calculadora
Preparación de la solución de stock común
Volumen de DMSO necesario para reconstituir la masa específica de calceína, AM CAS 148504-34-1 a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es solo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos apropiados.
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 100.517 µL | 502.583 µL | 1.005 mL | 5.026 mL | 10.052 mL |
| 5 mM | 20.103 µL | 100.517 µL | 201.033 µL | 1.005 mL | 2.01 mL |
| 10 mM | 10.052 µL | 50.258 µL | 100.517 µL | 502.583 µL | 1.005 mL |
Imagenes
Figura 1. Imágenes simultáneas de células HeLa vivas y apoptóticas marcadas con calceína AM (cat. 22002) y conjugado de anexina V-iFluor® 647 (cat. 20074).
Figura 2. Imágenes de células vivas HeLa teñidas con Calcein, AM (Cat.22002).
Figura 3. Imágenes de células vivas HeLa teñidas con Calcein, AM (Cat.22002). Los núcleos celulares se tiñeron con Hoechst 33342 (Blue, Cat#17535).
Figura 4. Esquema de modulación de temperatura experimental. Las células se mantuvieron inicialmente a 37 °C. (A) HuMEC-1 y PBL se trataron durante 60 min a 37 °C. La TEM se realizó durante 120 min a 37 °C, 30 °C y 18°. (B) HuMEC-1 y PBL se trataron durante 60 min a 37 °C, 30 °C y 18 °C. El TEM se realizó durante 120 min en las mismas condiciones de temperatura que se trataron antes con HuMEC-1 y PBL. (C) HuMEC-1 y PBL se trataron durante 60 min a 37 °C, 30 °C o 18 °C con recalentamiento posterior a 37 °C durante TEM durante 120 min. Fuente: Influence of hypothermia and subsequent rewarming upon leukocyte-endothelial interactions and expression of Junctional-Adhesion-Molecules A and B by Bogert et al., Scientific Reports, Feb. 2016.
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Bibliografía
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Application Notes (en Ingles)
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