Kit de ensayo de ácido glutámico fluorimétrico Amplite® *Fluorescencia roja* El kit proporciona un método rápido y sensible para la medición de ácido glutámico en varias muestras biológicas.
Descripción
El ácido glutámico es uno de los 20 aminoácidos proteinogénicos. Los aniones carboxilato y las sales del ácido glutámico se conocen como glutamatos. El glutamato es un neurotransmisor importante que juega un papel clave en la potenciación a largo plazo y es importante para el aprendizaje y la memoria. El ácido glutámico es el precursor de GABA pero tiene una función algo opuesta. Podría desempeñar un papel en el funcionamiento normal del corazón y la próstata. Como uno de los pocos nutrientes que cruza la barrera hematoencefálica, el ácido glutámico se usa en el tratamiento de enfermedades como la depresión, ADD y ADHD, fatiga, alcoholismo, epilepsia, distrofia muscular, retraso mental y esquizofrenia.
El kit de ensayo de ácido glutámico fluorimétrico Amplite® proporciona un método rápido y sensible para la medición de ácido glutámico en varias muestras biológicas. En el ensayo, el sistema acoplado a enzimas cataliza la reacción entre el ácido L-glutámico y el NADP para producir NADPH, que nuestro sensor de NADPH reconoce específicamente y recicla de nuevo a NADP. El producto de fluorescencia roja se produce durante esta reacción. La señal se puede leer con un lector de microplacas de fluorescencia o con un lector de microplacas de absorbancia.
Con nuestro kit fluorimétrico de ácido glutámico Amplite®, hemos detectado tan solo 10 µM de ácido glutámico en un volumen de reacción de 100 µL. El ensayo es robusto y se puede adaptar fácilmente para una amplia variedad de aplicaciones que requieren la medición de ácido glutámico.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-10054 | Amplite® Fluorimetric Glutamic Acid Assay Kit *Red Fluorescence* | 200 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 540 nm |
| Emisión | 590 nm |
| Cutoff | 570 nm |
| Placa recomendada | Negra sólida |
Componentes
| Componente A: Enzyme mix | 1 botella (polvo liofilizado) |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (10 mL) |
| Componente C: NADP | 1 vial |
| Componente D: Glutamic Acid | 1 vial |
| Componente E: Buffer de dilución | 1 bottela (10 mL) |
PREPARACION DE SOLUCIONES DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre de NADP (200X):
Agregue 100 µl de buffer de dilución (componente E) en el vial de NADP (componente C) para preparar una solución madre de NADP 200X. - Solución estándar de ácido glutámico (100 mM):
Agregue 200 µl de buffer de dilución (componente E) en el vial de ácido glutámico (componente D) para preparar una solución estándar de ácido glutámico 100 mM.
PREPARACION DE SOLUCION ESTANDAR
Estándar de acetilcolinesterasa
Para mayor comodidad, utilice el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/10054
Tome 100 mM de solución estándar de ácido glutámico y realice 1:100 en buffer de dilución (componente E) para preparar una solución estándar de ácido glutámico 1000 µM (SD7). Tome 1000 µM de solución estándar de ácido glutámico (SD7) y realice diluciones en serie 1:3 para obtener estándares de ácido glutámico diluidos en serie (SD6 – SD1) con buffer de dilución (componente E).
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
- Agregue 10 ml de buffer de ensayo (componente B) a la botella de mezcla de enzimas (componente A).
- Agregue 50 µL de solución madre de NADP 200X en la botella de mezcla de enzimas y mezcle bien para obtener una solución de trabajo de ácido glutámico. Nota: Esta solución de trabajo de ácido glutámico es suficiente para dos placas de 96 pocillos. Es inestable a temperatura ambiente, y debe usarse con prontitud dentro de las 2 primeras horas y evitar la exposición a la luz. Nota: Alternativamente, se puede preparar una solución madre de mezcla enzimática 50X agregando 200 μL de H2O en la botella de mezcla enzimática (componente A), y luego preparar la solución de trabajo de ácido glutámico mezclando la solución madre con buffer de ensayo (componente B ) y solución madre de NADP 200X proporcionalmente.
Imagen
Figura 1. La respuesta a la dosis de ácido glutámico se midió con el kit de ensayo de ácido glutámico Amplite® en una placa negra sólida de 96 pozos utilizando un lector de microplacas de fluorescencia Gemini (Molecular Devices).
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Bibliografía
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Referencias
Ver todas las 74 referencias: Citation Explorer
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