Indicadores de Sodio

INDICADORES DE SODIO

Los indicadores de sodio, que muestran un aumento de la fluorescencia al unirse a Na⁺, se pueden utilizar para medir la actividad de los canales y transportadores de sodio.

Sodio (Na⁺) en Fisiología

• El sodio, junto con el potasio (K⁺), es uno de los cationes metálicos monovalentes más importantes en los organismos vivos. Los canales de sodio, los canales catiónicos monovalentes no selectivos permeables al Na⁺ y los transportadores de Na⁺ desempeñan funciones críticas que incluyen la modulación de la actividad neuronal, la potenciación del transporte de nutrientes y las moléculas de señalización y la regulación del equilibrio de solutos.

• Los fármacos dirigidos a los canales permeables de Na⁺ y a los transportadores de Na⁺ proporcionan tratamientos eficaces para una diversidad de indicaciones: epilepsia, dolor, trastorno bipolar, depresión, diuresis y muchas otras. Una lista cada vez más larga de canales permeables al Na⁺ y de transportadores de Na⁺ se asocia con una amplia variedad de trastornos. Como resultado, el interés en los canales permeables al Na⁺ y en los transportadores de Na⁺ como objetivos farmacológicos sigue siendo alto.

• Debido a que ampliar nuestra comprensión de los canales permeables de Na⁺ y los transportadores de Na⁺ es de gran interés para los investigadores tanto básicos como de descubrimiento de fármacos, se requiere un medio sencillo para medir su actividad. Desafortunadamente, medir los niveles y la dinámica de Na⁺ intracelular y extracelular utilizando indicadores fluorescentes es un desafío.

En la mayoría de las células en reposo, las concentraciones citoplasmáticas de Na⁺ son ~5 mM, mientras que las concentraciones de K⁺ son superiores a 100 mM. Por el contrario, las concentraciones extracelulares de Na⁺ suelen ser >100 mM, mientras que las concentraciones de K⁺ están en el rango de 3 a 5 mM. Por lo tanto, un sensor de Na⁺ eficaz debe poder discriminar entre K⁺, Na⁺ y otros cationes fisiológicos comunes y al mismo tiempo poseer una afinidad de Na⁺ apropiada para detectar cambios fisiológicamente relevantes en las concentraciones de Na⁺.

ION ofrece una colección de los mejores Indicadores de Sodio de su clase con excelente selectividad para Na+ sobre K+ y otros iones, y afinidades variables adecuadas para su aplicación.

ING-2

ION Natrium Green-2 (ING-2), anteriormente conocido como Asante Natrium Green (ANG-2), es un pequeño fluorocromo sintético fusionado con un resto de unión a Na⁺. En condiciones en las que Na⁺ no está unido, la fluorescencia del sensor se apaga significativamente. Cuando se une Na⁺, se alivia la extinción y la fluorescencia del sensor aumenta drásticamente.

ING-2 (EX 525 nm, EM 545 nm, Kd 20 mM) es el mejor sensor fluorescente de Na⁺ de su clase que reemplaza a los indicadores de Na⁺ anteriores, como SBFI y CoroNa Green. Su afinidad por el Na⁺ es muy adecuada para responder a los cambios en las concentraciones intracelulares de Na⁺ resultantes de la activación de los canales permeables al Na⁺ de la membrana plasmática y de los transportadores de Na⁺. Es compatible con una amplia variedad de detectores, incluidos microscopios fluorescentes, lectores de placas y citómetros de flujo que utilizan conjuntos de filtros comunes (por ejemplo, YFP y FITC), así como enfoques multifotónicos. ING-2 también ha demostrado ser útil para la detección de alto rendimiento (HTS). Ver Producto

ING-1

ING-1 (EX 525 nm, EM 545 nm, Kd 92 mM) es un indicador de sodio fluorescente de color amarillo verdoso con una menor afinidad por el sodio que ING-2. Ver Producto

SBFI

SBFI es un indicador verde radiométrico excitable por luz ultravioleta para mediciones de sodio intracelular (Na⁺). Ex/Em: 340/505 nm se puede utilizar para medir el SBFI unido a Na⁺, y Ex/Em: 380/505 nm se puede utilizar para detectar el SBFI libre de Na⁺. Es ~18 veces más selectivo para Na⁺ que para K⁺. La ratiometría es óptima para aplicaciones de imágenes donde se desea la cuantificación de las concentraciones intracelulares de Na⁺ y reduce los efectos del fotoblanqueo, la carga de tinte heterogéneo y la morfología celular variable. Ver Producto

ION ofrece los únicos ensayos de canal de sodio que miden el flujo del ion nativo, el sodio. Obtenga más información sobre todas nuestras soluciones de ensayo de canales de sodio aquí.

Caracteristicas y formatos de indicadores

Ofrecemos ING-2 en formas permeable a membrana e impermeable a membrana, así como en nuestros ensayos Brilliant Sodium. SBFI e ING-1 también se ofrecen como ésteres y sales de AM.

Ésteres del grupo acetoximetilo (AM), permeables a las células

Las formas nativas de los indicadores fluorescentes sensibles al Na⁺ tienen carga negativa y son impermeables a la membrana. Sin embargo, enmascarar la carga negativa utilizando restos no polares unidos a ésteres (ésteres AM) permite que las moléculas ingresen a las células mediante difusión pasiva. Una vez dentro de la célula, las ubicuas enzimas esterasas intracelulares promueven la rápida hidrólisis de los ésteres de AM, dejando la forma activa y altamente polar del indicador atrapada dentro de la célula.

Reactivos para mejorar la carga, retención y supresión de fondo del indicador.

Aunque las formas AM de los indicadores fluorescentes de Na⁺ de ION cruzan fácilmente la membrana plasmática, existen otros factores que pueden afectar la capacidad de carga de los indicadores en las células. Debido a que las formas AM de los indicadores son bastante hidrófobas, es común usar el tensioactivo no iónico, Pluronic F-127, para mejorar su solubilidad en solución acuosa, mejorando así su carga en las células. Pluronic F-127 en las concentraciones empleadas para cargar indicadores en las células generalmente se tolera bien. Si bien Pluronic F-127 no es absolutamente esencial para cargar la mayoría de los indicadores fluorescentes de Na⁺ y Tl⁺ en las células, es muy recomendable.

Otro factor que puede afectar la carga celular y la localización intracelular es la presencia de proteínas transportadoras de aniones tanto en el plasma como en las membranas intracelulares. En muchos tipos de células, la actividad de estos transportadores puede dar como resultado la compartimentación de los indicadores en compartimentos intracelulares, así como la extrusión de los indicadores fuera de la célula. Ambos procesos pueden reducir drásticamente los niveles de señal a fondo y, en algunos tipos de células (por ejemplo, células CHO), hacer que la carga adecuada de indicadores de sodio sea casi imposible. Afortunadamente, el probenecid, un inhibidor del transporte de aniones orgánicos, puede ser un medio eficaz para inhibir los transportadores, mejorando la localización citoplasmática y la retención del indicador. ION ofrece una cómoda solución de probenecid 100X que se puede utilizar junto con nuestros indicadores fluorescentes sensibles a Na⁺. Si bien el probenecid generalmente se tolera bien en el transcurso del tiempo, se han informado efectos en experimentos típicos sobre la actividad de los canales TRP.

¡Sea Brilliant! Explore nuestra línea de ensayos e indicadores de canales de sodio

Productos	Excitación	Emisión	Kd
ING-2 AM ING-2 AM es un indicador de sodio fluorescente de color amarillo verdoso. Permeable a la membrana. Mayor afinidad por el sodio que el ING-1. Adecuado para la detección de alto rendimiento de canales y transportadores de sodio.	525 nm	545 nm	20 mM
ING-2 TMA⁺ Salt Indicador de sodio fluorescente de color amarillo verdoso, impermeable a la membrana. Mayor afinidad por el sodio que el ING-1. Adecuado para la detección de alto rendimiento de canales y transportadores de sodio.	525 nm	545 nm	20 mM
ING-1 AM ING-1 AM es un indicador de sodio fluorescente de color amarillo verdoso. Permeable a la membrana. Menor afinidad por el sodio que ING-2.	525 nm	545 nm	92 mM
SBFI AM SBFI AM es un indicador ratiométrico de sodio. Excitable por rayos UV. Permeable a la membrana.	340 nm, 380 nm	505 nm	4 mM
SBFI K⁺ Salt Indicador ratiométrico de sodio, impermeable a membrana.	340 nm, 380 nm	505 nm	4 mM