Indicadores de Potasio

Indicadores de Potasio

Indicadores de Potasio

Los indicadores de potasio son moléculas que exhiben un aumento de fluorescencia al unirse a K⁺.

Potasio (K⁺) en Fisiología

Debido a que ampliar nuestro conocimiento sobre los canales y transportadores de K⁺ es de gran interés para los investigadores tanto básicos como de descubrimiento de fármacos, es fundamental disponer de un medio sencillo para medir su actividad. Desafortunadamente, medir los niveles y la dinámica de K⁺ intracelular y extracelular utilizando indicadores fluorescentes es un desafío. En la mayoría de las células en reposo, las concentraciones de K⁺ citoplasmáticas están por encima de 100 mM, mientras que las concentraciones de Na⁺ están en el rango de 3 a 5 mM. Por el contrario, las concentraciones extracelulares de K⁺ suelen estar en el rango de 3 a 5 mM, mientras que las concentraciones de Na⁺ están por encima de 100 mM. Por lo tanto, un sensor de K⁺ eficaz debe poder discriminar entre K⁺, Na⁺ y otros cationes fisiológicos comunes y al mismo tiempo poseer una afinidad por K⁺ adecuada para detectar cambios fisiológicamente relevantes en las concentraciones de K⁺.

Indicadores fluorescentes de Potasio

• A diferencia de PBFI, las propiedades espectrales de la familia IPG de indicadores K⁺ los hacen convenientes para usar con conjuntos de filtros comunes (por ejemplo, YFP y FITC), así como con enfoques multifotónicos, y el rango de afinidades de K⁺ los hace útiles para aplicaciones tan diversas como detección de K⁺ extracelular para monitorear la dinámica del K⁺ intracelular. La familia IPG de indicadores K⁺ es compatible con una amplia variedad de detectores, incluidos microscopios fluorescentes, lectores de placas, citómetros de flujo y sensores de estado sólido dopados con indicadores fluorescentes.

• Una extensa investigación ha proporcionado la familia ION Potassium Green (IPG) de excelentes sensores K⁺, anteriormente conocida como Asante Potassium Green (APG). Estas moléculas son pequeños fluorocromos sintéticos que incorporan una fracción de unión a K⁺. En condiciones en las que K⁺ no está unido, la fluorescencia del sensor se apaga significativamente. Cuando se une K⁺, se alivia la extinción y la fluorescencia del sensor aumenta drásticamente. La familia de indicadores IPG son los mejores reemplazos de su clase para el indicador K⁺ heredado, PBFI.

IPG-1

(EX 525 nm, EM 545 nm, Kd 50 mM) es la afinidad más baja de los indicadores ION Potassium Green. Es el indicador mejor posicionado para responder a cambios modestos en las concentraciones intracelulares de K⁺ resultantes de la activación de los canales de K⁺ de la membrana plasmática.

IPG-2

(EX 525 nm, EM 545 nm, Kd 18 mM) es el indicador ION Potassium Green con afinidad intermedia. Actualmente, IPG-2 es nuestro indicador de K⁺ intracelular más popular.

IPG-4

(EX 525 nm, EM 545 nm, Kd 7 mM) tiene la mayor afinidad por K⁺ de nuestros indicadores de longitud de onda única, lo que lo hace apropiado para condiciones en las que puede haber grandes cambios en el K⁺ intracelular (por ejemplo, sinapsis muy activas) o como extracelular. Sensor K⁺.

PBFI

(EX 340/380 nm, EM 505 nm, Kd 4 mM) PBFI, AM es un indicador de potasio que es radiométrico y excitable con luz ultravioleta. Esta forma de éster de acetoximetilo (AM) es útil para mediciones no invasivas de los niveles de potasio intracelular.

Si bien la familia de colorantes IPG son excelentes indicadores fluorescentes de K⁺, los desafíos de discriminar entre K⁺ y Na⁺ no son triviales y, junto con los cambios a menudo modestos en el K⁺ intracelular o extracelular, se obtienen señales relativamente pequeñas en comparación con las observadas con los indicadores fluorescentes sensibles al Ca²⁺. Para descubrir moduladores del canal de potasio, el uso del ensayo de flujo de detección de alto rendimiento es una alternativa preferida a los indicadores fluorescentes sensibles a K⁺. Haga clic en estos enlaces para obtener más información sobre los indicadores de talio o los ensayos del canal de potasio que utilizan talio.

Caracteristicas y formatos de indicadores 

Proporcionamos nuestra familia IPG de indicadores fluorescentes sensibles a K⁺ en formas permeables a membrana e impermeables a membrana.

Ésteres del grupo acetoximetilo (AM), permeables a las células

Las formas nativas de los indicadores fluorescentes de potasio tienen carga negativa y son impermeables a la membrana. Sin embargo, enmascarar la carga negativa utilizando restos no polares unidos a ésteres (ésteres AM) permite que las moléculas ingresen a las células mediante difusión pasiva. Una vez dentro de la célula, las ubicuas enzimas esterasas intracelulares promueven la rápida hidrólisis de los ésteres de AM, dejando la forma activa y altamente polar del indicador atrapada dentro de la célula.

Reactivos para mejorar la carga y retención de indicadores.

Aunque las formas AM de los indicadores K⁺ fluorescentes de ION cruzan fácilmente la membrana plasmática, existen otros factores que pueden afectar la capacidad de carga de los indicadores en las células. Debido a que las formas AM de los indicadores son bastante hidrófobas, es común usar el tensioactivo no iónico, Pluronic F-127, para mejorar su solubilidad en solución acuosa, mejorando así su carga en las células. Pluronic F-127 en las concentraciones empleadas para cargar indicadores en las células generalmente se tolera bien. Si bien Pluronic F-127 no es absolutamente esencial para cargar la mayoría de los indicadores K⁺ fluorescentes en las células, es muy recomendable.

Otro factor que puede afectar la carga celular y la localización intracelular es la presencia de proteínas de transporte capaces de transportar muchos indicadores fluorescentes sensibles a iones. En muchos tipos de células, la actividad de estos transportadores puede dar como resultado la compartimentación de los indicadores en compartimentos intracelulares, así como la extrusión de los indicadores fuera de la célula. Ambos procesos pueden reducir drásticamente los niveles de señal a fondo y, en algunos tipos de células (por ejemplo, células CHO), hacen que la carga adecuada de indicadores fluorescentes selectivos de K⁺ sea casi imposible. Afortunadamente, los inhibidores de estas proteínas de transporte pueden ser un medio eficaz para mejorar la localización citoplasmática y la retención del indicador. ION ofrece una cómoda solución inhibidora ION-Pro 100X que se puede utilizar junto con cualquiera de nuestros indicadores fluorescentes sensibles a K⁺.

¡Sea Brillant! Explore nuestra línea de indicadores de potasio

Nuestra colección de indicadores de iones impermeables y permeables a membrana dirigidos a K⁺.

Productos	Excitación	Emisión	Kd
IPG-4 AM Fluorescente de color amarillo verdoso, indicador de potasio, permeable a la membrana. Mayor afinidad por el potasio que IPG-1 e IPG-2, con selectividad mejorada por el potasio sobre el sodio.	525 nm	545 nm	7 mM
IPG-1 AM IPG-1 AM es un indicador de potasio fluorescente de color amarillo verdoso. Permeable a la membrana. Menor afinidad por el potasio que IPG-2 e IPG-4. Diseñado para medir cambios en el potasio en ambientes con altas concentraciones de potasio.	525 nm	545 nm	50 mM
IPG-1 TMA⁺ Salt Fluorescente de color amarillo verdoso, indicador de potasio, impermeable a la membrana. Menor afinidad por el potasio (Kd = 50 mM) que IPG-2 e IPG-4.	525 nm	545 nm	50 mM
IPG-2 AM IPG-2 es un indicador de potasio fluorescente de color amarillo verdoso y permeable a la membrana. Menor afinidad por el potasio que IPG-4 y mayor afinidad que IPG-1	525 nm	545 nm	18 mM
IPG-2 TMA⁺ Salt IPG-2 es un indicador de potasio fluorescente de color amarillo verdoso. Impermeable a la membrana. Menor afinidad por el potasio que IPG-4 y mayor afinidad que IPG-1	525 nm	545 nm	18 mM
IPG-4 TMA⁺ Salt Fluorescente de color amarillo verdoso, indicador de potasio. Impermeable a la membrana. Mayor afinidad por el potasio que IPG-1 e IPG-2, con selectividad mejorada por el potasio sobre el sodio.	525 nm	545 nm	7 mM
PBFI AM PBFI AM es un indicador ratiométrico de potasio, permeable a la membrana.	340 nm, 380 nm	505 nm	4 mM
PBFI K⁺ Salt Indicador ratiométrico de potasio, impermeable a membrana.	340 nm, 380 nm	505 nm	5 mM