Etiquetado de anticuerpos y proteínas

Marcar un anticuerpo con una etiqueta específica se ha convertido en un procedimiento importante y rutinario en las ciencias biológicas y la investigación médica. Las etiquetas, que van desde marcadores visuales como tintes fluorescentes hasta moléculas de hapteno como la biotina, se pueden usar para mejorar la visibilidad de los complejos inmunes y las interacciones proteína-proteína o se pueden usar en el aislamiento y la purificación de una proteína.

Al determinar qué tipo de etiqueta elegir, céntrese en la aplicación posterior para la que se utilizará el anticuerpo. Las etiquetas fluorescentes se utilizan predominantemente en aplicaciones de imágenes celulares, citometría de flujo, transferencia fluorescente e inmunofluorescencia. Por el contrario, las etiquetas enzimáticas, como HRP y AP, se usan comúnmente para aplicaciones de transferencia, ELISA e inmunohistoquímica. Las etiquetas de hapteno, como la biotina, son las más versátiles de las posibles opciones de etiquetas, ya que se pueden usar en el aislamiento y la purificación de proteínas y en cualquiera de las aplicaciones antes mencionadas.

AAT Bioquest ofrece un conjunto completo de kits de etiquetado de proteínas y anticuerpos para elegir. Diseñados pensando en el científico novato, estos kits tienen los protocolos más sencillos y requieren la menor experiencia práctica.

Células HeLa teñidas con antitubulina de conejo seguido de IgG anti-conejo de cabra iFluor® 555, conjugado Phalloidin-iFluor® 488 y DAPI.

Kits de etiquetado de anticuerpos – Resumen

Comparación de kits de anticuerpos de etiquetado 


 
ReadiLink™ KitsReadiLink™ xtra Kits
Buccutite™ Kits
Cantidad de anticuerpo etiquetado por reacción50 µg 50 µg 25 µg, 50 µg or 1 mg
Química de etiquetado Dirigido a los grupos libres de amina mediante colorantes reactivos con amina Dirigido a los grupos libres de amina mediante colorantes reactivos con aminaUtiliza dos enlazadores patentados para facilitar la conjugación proteína-proteína
Compatible con BSA o algun otro estabilizador? NoSiNo
Requiere purificación? NoNoNo
Variación de lote a lote MínimaMínima Mínima
Aplicaciones1 Imaging, FC, IF, WB Imaging, FC, IF, WB FC, IF, IHC, WB, ELISA
Etiquetas disponibles iFluor® dyes, mFluor™ dyes, Alexa Fluor® equivalent AF dyes, FITC, Cy3, Cy5, Cy7, BiotiniFluor® dyes, Alexa Fluor® equivalent AF dyes, FITC, Cy3, Cy5, Cy7PE, APC, Tandem Dyes, HRP, AP
Tipo de enlace entre la etiqueta y el anticuerpo CovalenteCovalenteCovalente
Tiempo de trabajo ~10 minutos ~10 minutos ~15 minutos
Tiempo requerido para conjugación 1 hr 1 hr 2 hr
  1. FC = flow cytometry; IF = immunofluorescence; IHC = immunohistochemistry; WB = Western blot; ELISA = enzyme-linked immunosorbent assay.
Kits de Etiquetado Rápido de Anticuerpos ReadiLink™ 

Los kits de etiquetado rápido de anticuerpos ReadiLink™ de AAT Bioquest proporcionan un método rápido y conveniente para etiquetar volúmenes de microescala de anticuerpos con nuestros tintes superiores iFluor®, tintes mFluor™ u otras etiquetas. La química única de los kits ReadiLink™ permite a los investigadores etiquetar y recuperar sin esfuerzo el 100 % de sus anticuerpos sin un paso de purificación. Dado que los conjugados ReadiLink™ están marcados covalentemente, son estables para el almacenamiento a largo plazo. Son ideales para aplicaciones exigentes, que incluyen microscopía fluorescente, imágenes multicolores, citometría de flujo multiplex, detección primaria, IHC, FISH, ELISA y más.

Kits de Etiquetado Rápido de Anticuerpos ReadiLink™ 

Características clave de los kits de etiquetado rápido de anticuerpos ReadiLink™

  • Etiquetar anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales u otras proteínas
  • Protocolo de etiquetado de dos pasos rápido y simple, no se necesita experiencia en química o conjugación
  • Útil para marcar 100 µg de anticuerpo (dos reacciones de marcado separadas de 50 µg de anticuerpo)
  • 100 % de recuperación de anticuerpos, NO se requiere purificación del producto
  • Conjugados listos para usar en 1 hora, con tan solo ~10 minutos de tiempo práctico
  • Elección de tintes iFluor®, tintes mFluor™, tintes XFD equivalentes a Alexa Fluor®, FITC, Cy3, Cy5, Cy7, BSA, KLH o biotina
  • Evite el uso de buffers que contengan aminas (p. ej., Tris o glicina)
  • Las proteínas estabilizadoras (p. ej., BSA o gelatina) deben eliminarse antes del etiquetado. Para los kits de etiquetado de anticuerpos compatibles con BSA, use los kits de etiquetado de anticuerpos ReadiLink™ xtra Rapid

Conveniente diseño para  máximos resultados

Los kits de etiquetado rápido de anticuerpos ReadiLink™ utilizan etiquetas reactivas con amina para preparar conjugados etiquetados covalentemente. Estos marcadores reactivos se dirigen selectivamente y se unen a aminas primarias, como residuos de lisina, en el anticuerpo de interés. Para etiquetar su anticuerpo, mezcle su solución de anticuerpos (concentración de ~1 mg/ml) con el tampón de reacción ReadiLink™, agregue la mezcla al vial de la etiqueta preformulada e incube durante 30 a 60 minutos. Por último, agregue el TQ™-Dyed Quench Buffer a su mezcla y mezcle bien. Esta parte es clave ya que elimina tanto la interferencia de fondo como el paso de purificación de la columna. Después de 10 minutos de incubación, sus conjugados están listos para usar.

Alternativa de alto rendimiento a los kits de etiquetado de anticuerpos Lightning-Link®

Análisis de citometría de flujo de células PBMC humanas. Anticuerpo anti-CD4 humano preparado con el kit de etiquetado de anticuerpos ReadiLink™ Rapid iFluor488 (Cat No. 1255) o Lightning-Link®Rapid Alexa Fluor ®488. La señal de fluorescencia se controló utilizando el citómetro de flujo ACEA NovoCyte en el canal FITC.
Labeling KitCD4(SK3)- ConjugateStain Index
ReadiLink™ KitCD4-iFluor®488 Conjugate43
Lightning-Link®KitCD4-Alexa Fluor®488 Conjugate26
Tabla 2. Guia de selección de kits de Etiquetado Rápido de anticuerpos ReadiLink™
Fluorophore
Fluorophore Equivalent
Ex/Em (nm)
Imaging
Flow Cytometry
Cat No.
mFluor™ Violet 420Cascade® Blue398/411 -Yes1105
iFluor® 350AMCA, Alexa Fluor® 350345/442Yes -1220
mFluor™ Violet 450Pacific Blue®403/454 -Yes1100
mFluor™ Violet 510- 414/508 -Yes1110
iFluor® 488FITC, Alexa Fluor® 488491/514YesYes1255
FITC- 494/520YesYes1299
mFluor™ Violet 540Pacific Orange®405/537 -Yes1114
Cy3- 555/565Yes -1290
iFluor® 555Cy3, Alexa Fluor® 555552/567Yes -1227
mFluor™ Blue 570R-PE553/570 -Yes1120
iFluor® 594Texas Red®, Alexa Fluor® 594592/614Yes- 1230
mFluor™ Green 620 -

Kits de etiquetado de anticuerpos ReadiLink™ xtra compatibles con BSA

Los kits de etiquetado de anticuerpos ReadiLink™ xtra Rapid con compatibilidad BSA llevan el etiquetado de anticuerpos primarios a un nuevo nivel de conveniencia. Utilizando un protocolo de etiquetado optimizado combinado con viales de etiquetas especialmente formuladas, los kits ReadiLink™ xtra permiten el etiquetado rápido y reproducible de cantidades de microgramos de un anticuerpo primario en presencia de aditivos de tampón comunes y proteínas estabilizadoras. En solo dos pasos simples y sin purificación en columna, marque covalentemente anticuerpos adecuados para usar en cualquier aplicación inmunológica.

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Los kits de etiquetado de anticuerpos ReadiLink™ xtra Rapid con compatibilidad BSA llevan el etiquetado de anticuerpos primarios a un nuevo nivel de conveniencia. Utilizando un protocolo de etiquetado optimizado combinado con viales de etiquetas especialmente formuladas, los kits ReadiLink™ xtra permiten el etiquetado rápido y reproducible de cantidades de microgramos de un anticuerpo primario en presencia de aditivos de tampón comunes y proteínas estabilizadoras. En solo dos pasos simples y sin purificación en columna, marque covalentemente anticuerpos adecuados para usar en cualquier aplicación inmunológica.

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